| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 目录 | 第8-10页 |
| 符号说明 | 第10-12页 |
| 第一部分 文献综述 | 第12-22页 |
| 第一章 病毒样颗粒的研究进展 | 第12-16页 |
| 1 VLPs的来源及获得途径 | 第12-13页 |
| ·来源于病毒的VLPs及获得途径 | 第12-13页 |
| ·人工合成的VLPs及获得途径 | 第13页 |
| 2 VLPs的应用 | 第13-16页 |
| ·VLPs在基础研究中的应用 | 第14页 |
| ·VLPs在疫苗研究中的作用 | 第14-15页 |
| ·VLPs在血清学诊断中的应用 | 第15-16页 |
| 第二章 cDNA文库的研究进展 | 第16-22页 |
| 1 全长cDNA文库构建方法 | 第16-17页 |
| 2 全长cDNA文库的应用 | 第17-22页 |
| ·筛选与性状相关的重要基因及获得目的基因的全长cDNA | 第17-18页 |
| ·表达序列标签(EST)的开发 | 第18-19页 |
| ·通过消减cDNA文库克隆特异的表达基因 | 第19页 |
| ·为SSR引物的开发及筛选提供平台 | 第19页 |
| ·结合DNA芯片技术对生物体的基因的时空表达进行分析 | 第19-20页 |
| ·通过蛋白互作(或抗原抗体反应)从cDNA文库中筛选相关蛋白基因 | 第20-22页 |
| 第二部分 研究报告 | 第22-49页 |
| 第三章 RHDV病毒样颗粒的制备 | 第22-34页 |
| 0 引言 | 第22-23页 |
| 1 材料与方法 | 第23-28页 |
| ·材料与试剂 | 第23页 |
| ·材料 | 第23页 |
| ·试剂 | 第23页 |
| ·相关引物 | 第23页 |
| ·仪器和设备 | 第23页 |
| ·实验方法 | 第23-28页 |
| ·杆状病毒转移载体的构建和重组Bacmid的筛选 | 第23-25页 |
| ·杆状病毒转移载体的构建 | 第23-25页 |
| ·重组Bacmid的筛选 | 第25页 |
| ·重组Bacmid转染昆虫细胞及重组病毒的筛选 | 第25-26页 |
| ·表达产物的间接免疫荧光检测(IFA) | 第26页 |
| ·Western blot鉴定表达及纯化蛋白 | 第26-27页 |
| ·病毒样颗粒(VLPs)的纯化 | 第27页 |
| ·电镜检测VLPs | 第27-28页 |
| 2 结果 | 第28-32页 |
| ·杆状病毒转移载体的构建 | 第28页 |
| ·杆状病毒感染Sf9细胞 | 第28-29页 |
| ·重组杆状病毒表达蛋白的鉴定 | 第29-30页 |
| ·间接免疫荧光检测外源蛋白在Sf9细胞中的表达 | 第29页 |
| ·Western blot检测蛋白大小 | 第29-30页 |
| ·病毒样颗粒(VLPs)的形成及纯化 | 第30-32页 |
| ·病毒样颗粒VLPs的形成 | 第30页 |
| ·Western blot检测收集管中的蛋白 | 第30-31页 |
| ·纯化病毒的电镜鉴定 | 第31-32页 |
| 3 讨论 | 第32-34页 |
| 第四章 RK13细胞cDNA表达型文库构建 | 第34-49页 |
| 0 引言 | 第34页 |
| 1 材料与方法 | 第34-43页 |
| ·材料与试剂 | 第34-35页 |
| ·材料 | 第34页 |
| ·试剂 | 第34-35页 |
| ·文库鉴定引物 | 第35页 |
| ·仪器和设备 | 第35页 |
| ·实验方法 | 第35-43页 |
| ·RK13细胞总RNA的提取 | 第35-36页 |
| ·RK13 mRNA的分离 | 第36页 |
| ·RK-13 cDNA表达文库的构建 | 第36-43页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第37-38页 |
| ·cDNA第二链合成 | 第38-39页 |
| ·Proteinase K Digetion | 第39页 |
| ·Sfi I Digestion | 第39页 |
| ·cDNA Size Fractionation | 第39-40页 |
| ·pEXP-Lib载体的获得 | 第40-41页 |
| ·Ligation of ds cDNA of pEXP-lib | 第41页 |
| ·Transformstion of Recombinant Plasimd into E.Coli | 第41-42页 |
| ·Library Screen by PCR | 第42-43页 |
| 2 结果 | 第43-46页 |
| ·总RNA与mRNA的含量及纯度 | 第43-44页 |
| ·总RNA的含量及纯度 | 第43页 |
| ·mRNA的含量及纯度 | 第43-44页 |
| ·ds cDNA大片段的获得 | 第44-45页 |
| ·cDNA文库质量鉴定 | 第45-46页 |
| 3 讨论 | 第46-49页 |
| 结论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第60-61页 |
