| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第12-23页 |
| 1.1 聚γ-谷氨酸的简介 | 第12-13页 |
| 1.2 合成聚γ-谷氨酸的微生物 | 第13页 |
| 1.3 聚γ-谷氨酸的芽胞杆菌生物合成 | 第13-17页 |
| 1.3.1 内源谷氨酸的合成 | 第14-15页 |
| 1.3.2 聚γ-谷氨酸的合成与降解 | 第15-17页 |
| 1.4 微生物合成聚γ-谷氨酸的营养需求 | 第17-20页 |
| 1.5 环境胁迫对微生物的代谢调控 | 第20-21页 |
| 1.5.1 盐胁迫 | 第20页 |
| 1.5.2 热胁迫 | 第20-21页 |
| 1.5.3 碱胁迫 | 第21页 |
| 1.6 目的及意义 | 第21-23页 |
| 2 地衣芽胞杆菌WX-02摇瓶发酵工艺优化 | 第23-30页 |
| 2.1 引言 | 第23页 |
| 2.2 实验材料 | 第23-24页 |
| 2.2.1 菌种 | 第23页 |
| 2.2.2 培养基 | 第23页 |
| 2.2.3 主要实验试剂 | 第23-24页 |
| 2.2.4 主要实验仪器 | 第24页 |
| 2.3 实验方法 | 第24-26页 |
| 2.3.1 培养方法 | 第24页 |
| 2.3.2 碱胁迫强度优化 | 第24-25页 |
| 2.3.3 培养基成分优化 | 第25页 |
| 2.3.4 聚γ-谷氨酸含量的测定 | 第25页 |
| 2.3.5 数据处理 | 第25-26页 |
| 2.4 结果与分析 | 第26-29页 |
| 2.4.1 碱胁迫强度优化结果 | 第26-27页 |
| 2.4.2 培养基成分优化结果 | 第27-29页 |
| 2.5 小结 | 第29-30页 |
| 3 碱胁迫促进地衣芽胞杆菌聚γ-谷氨酸从头合成机理初探 | 第30-44页 |
| 3.1 引言 | 第30页 |
| 3.2 实验材料 | 第30-31页 |
| 3.2.1 菌种 | 第30页 |
| 3.2.2 培养基 | 第30页 |
| 3.2.3 主要实验试剂 | 第30-31页 |
| 3.2.4 主要实验仪器 | 第31页 |
| 3.3 实验方法 | 第31-36页 |
| 3.3.1 培养方法 | 第31页 |
| 3.3.2 葡萄糖的测定 | 第31页 |
| 3.3.3 生物量的测定 | 第31-32页 |
| 3.3.4 硝酸钠浓度的测定 | 第32页 |
| 3.3.5 聚γ-谷氨酸含量的测定 | 第32页 |
| 3.3.6 聚γ-谷氨酸分子量的测定 | 第32页 |
| 3.3.7 代谢副产物的检测 | 第32-33页 |
| 3.3.8 发酵尾气中氧气浓度和二氧化碳浓度的检测 | 第33页 |
| 3.3.9 基因转录水平分析 | 第33-35页 |
| 3.3.10 数据处理 | 第35-36页 |
| 3.4 结果与分析 | 第36-43页 |
| 3.4.1 碱胁迫对聚γ-谷氨酸发酵过程的影响 | 第36-37页 |
| 3.4.2 碱胁迫对谷氨酸合成相关基因转录水平的影响 | 第37-39页 |
| 3.4.3 碱胁迫对菌体呼吸速率和呼吸商的影响 | 第39-40页 |
| 3.4.4 碱胁迫对主要代谢副产物的影响 | 第40-42页 |
| 3.4.5 碱胁迫对聚γ-谷氨酸分子量的影响 | 第42-43页 |
| 3.5 小结 | 第43-44页 |
| 4 碱胁迫增强聚γ-谷氨酸从头合成的关键效应基因挖掘 | 第44-75页 |
| 4.1 引言 | 第44页 |
| 4.2 实验材料 | 第44-51页 |
| 4.2.1 菌株和质粒 | 第44-46页 |
| 4.2.2 培养基 | 第46-47页 |
| 4.2.3 工具酶及试剂 | 第47页 |
| 4.2.4 PCR引物 | 第47-50页 |
| 4.2.5 抽提液和缓冲液 | 第50-51页 |
| 4.2.6 主要实验仪器 | 第51页 |
| 4.3 实验方法 | 第51-56页 |
| 4.3.1 核酸水平操作 | 第51-54页 |
| 4.3.2 基因工程菌株的构建 | 第54-55页 |
| 4.3.3 培养方法 | 第55-56页 |
| 4.3.4 生物量的测定 | 第56页 |
| 4.3.5 葡萄糖的测定 | 第56页 |
| 4.3.6 聚γ-谷氨酸含量的测定 | 第56页 |
| 4.3.7 乙偶姻、2,3-丁二醇浓度的检测 | 第56页 |
| 4.3.8 基因转录水平分析 | 第56页 |
| 4.3.9 数据处理 | 第56页 |
| 4.4 结果与分析 | 第56-73页 |
| 4.4.1 碱胁迫增强聚γ-谷氨酸从头合成的关键候选基因的确定 | 第56-57页 |
| 4.4.2 motA、yhbJ、swrA和degU基因缺失菌株的构建 | 第57-60页 |
| 4.4.3 motA、yhbJ、 swrA和degU分别缺失对聚γ-谷氨酸合成的影响 | 第60-61页 |
| 4.4.4 degU回补菌株的构建 | 第61-64页 |
| 4.4.5 degU回补表达对聚γ-谷氨酸产量的影响 | 第64-65页 |
| 4.4.6 degU强化表达菌株的构建 | 第65-66页 |
| 4.4.7 degU对碱胁迫增强聚γ-谷氨酸从头合成的影响 | 第66-67页 |
| 4.4.8 degU强化表达对聚γ-谷氨酸发酵的影响 | 第67-70页 |
| 4.4.9 swrA回补菌株的构建 | 第70页 |
| 4.4.10 swrA回补表达对聚γ-谷氨酸产量的影响 | 第70-71页 |
| 4.4.11 swrA强化表达菌株和swrA-degU共强化表达菌株的构建 | 第71-72页 |
| 4.4.12 swrA对碱胁迫增强聚γ-谷氨酸从头合成的影响 | 第72-73页 |
| 4.5 小结 | 第73-75页 |
| 5 结论与展望 | 第75-78页 |
| 5.1 结论 | 第75-76页 |
| 5.2 展望 | 第76-78页 |
| 参考文献 | 第78-85页 |
| 在读期间发表论文 | 第85-86页 |
| 致谢 | 第86页 |
