| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 1 绪论 | 第11-21页 |
| 1.1 蚬壳花椒概述 | 第11-12页 |
| 1.1.1 蚬壳花椒生物学特性 | 第11页 |
| 1.1.2 蚬壳花椒地理分布 | 第11-12页 |
| 1.1.3 蚬壳花椒国内外研究进展 | 第12页 |
| 1.2 乙醛酸循环与异柠檬酸裂解酶 | 第12-14页 |
| 1.2.1 乙醛酸循环 | 第12-13页 |
| 1.2.2 异柠檬酸裂解酶 | 第13页 |
| 1.2.3 异柠檬酸裂解酶在种子萌发中的作用 | 第13-14页 |
| 1.3 蚬壳花椒种子萌发前期内参基因筛选 | 第14-15页 |
| 1.3.1 实时荧光定量PCR | 第14-15页 |
| 1.3.2 内参基因筛选 | 第15页 |
| 1.4 大肠杆菌表达系统 | 第15-19页 |
| 1.4.1 PET表达系统简介 | 第16页 |
| 1.4.2 PET表达系统 | 第16页 |
| 1.4.3 大肠杆菌高效表达的影响因素 | 第16-17页 |
| 1.4.4 融合蛋白表达 | 第17-18页 |
| 1.4.5 蛋白质亲和标签 | 第18-19页 |
| 1.5 研究的目的意义与技术路线 | 第19-21页 |
| 1.5.1 课题来源 | 第19页 |
| 1.5.2 目的意义 | 第19-20页 |
| 1.5.3 研究内容 | 第20页 |
| 1.5.4 技术路线 | 第20-21页 |
| 2 蚬壳花椒种子萌发前期内参基因筛选 | 第21-33页 |
| 2.1 材料、仪器和试剂 | 第21-22页 |
| 2.1.1 试验材料 | 第21页 |
| 2.1.2 试验仪器 | 第21页 |
| 2.1.3 生化试剂与试剂盒 | 第21-22页 |
| 2.2 试验方法 | 第22-25页 |
| 2.2.1 试验用品预处理 | 第22页 |
| 2.2.2 总RNA提取 | 第22-23页 |
| 2.2.3 cDNA模板第一链的合成 | 第23页 |
| 2.2.4 实时定量PCR引物设计 | 第23-24页 |
| 2.2.5 实时荧光定量PCR | 第24-25页 |
| 2.2.6 数据分析 | 第25页 |
| 2.3 结果与分析 | 第25-30页 |
| 2.3.1 蚬壳花椒种子总RNA提取 | 第25-26页 |
| 2.3.2 实时定量PCR的扩增效率和扩增特异性 | 第26-27页 |
| 2.3.3 内参基因CT值分析 | 第27-28页 |
| 2.3.4 蚬壳花椒候选内参基因稳定性分析 | 第28-30页 |
| 2.4 讨论 | 第30-31页 |
| 2.5 小结 | 第31-33页 |
| 3 ICL在蚬壳花椒种子萌发前期生物活性分析 | 第33-39页 |
| 3.1 材料、仪器和试剂 | 第33页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第33页 |
| 3.1.2 实验仪器 | 第33页 |
| 3.2 试验方法 | 第33-35页 |
| 3.2.1 异柠檬酸裂解酶活性测定 | 第33-34页 |
| 3.2.2 蚬壳花椒ZdICL的实时荧光定量 | 第34-35页 |
| 3.3 结果与分析 | 第35-37页 |
| 3.3.1 ICL在蚬壳花椒种子萌发前期酶活性分析 | 第35-36页 |
| 3.3.2 ICL在蚬壳花椒种子萌发前期表达量分析 | 第36-37页 |
| 3.4 小结 | 第37-39页 |
| 4 蚬壳花椒ZdICL的克隆、表达与酶活检测 | 第39-67页 |
| 4.1 材料、仪器和试剂 | 第39-42页 |
| 4.1.1 试验材料 | 第39页 |
| 4.1.2 目的基因和载体 | 第39页 |
| 4.1.3 主要试剂 | 第39-40页 |
| 4.1.4 试验仪器 | 第40页 |
| 4.1.5 抗生素配制 | 第40-41页 |
| 4.1.6 缓冲液配制 | 第41页 |
| 4.1.7 SDS-PAGE所需试剂 | 第41页 |
| 4.1.8 融合蛋白纯化所需缓冲液 | 第41-42页 |
| 4.1.9 培养基配制 | 第42页 |
| 4.1.10 引物序列 | 第42页 |
| 4.2 试验方法 | 第42-50页 |
| 4.2.1 cDNA第一链的合成 | 第42-43页 |
| 4.2.2 目的基因ZdICL克隆 | 第43-47页 |
| 4.2.3 蚬壳花椒ZdICL基因的原核表达 | 第47-48页 |
| 4.2.4 目的蛋白纯化方法 | 第48-49页 |
| 4.2.5 融合蛋白ZdICL的浓度测定 | 第49-50页 |
| 4.2.6 ZdICL融合蛋白酶活性测定 | 第50页 |
| 4.3 结果与分析 | 第50-64页 |
| 4.3.1 蚬壳花椒ZdICL全长ORF扩增 | 第50-51页 |
| 4.3.2 酶切验证 | 第51页 |
| 4.3.3 ZdICL生物信息学分析 | 第51-58页 |
| 4.3.4 表达载体的构建与鉴定 | 第58-59页 |
| 4.3.5 重组质粒的鉴定 | 第59-60页 |
| 4.3.6 ZdICL蛋白形式的鉴定 | 第60-61页 |
| 4.3.7 诱导时间和温度的优化 | 第61-63页 |
| 4.3.8 ZdICL融合蛋白的纯化 | 第63页 |
| 4.3.9 ZdICL融合蛋白含量测定 | 第63-64页 |
| 4.3.10 ZdICL融合蛋白酶活测定 | 第64页 |
| 4.4 讨论 | 第64-66页 |
| 4.4.1 ZdICL生物信息学分析 | 第64-65页 |
| 4.4.2 目的蛋白的诱导表达 | 第65页 |
| 4.4.3 目的蛋白表达条件优化 | 第65页 |
| 4.4.4 目的蛋白纯化 | 第65-66页 |
| 4.5 小结 | 第66-67页 |
| 结论与展望 | 第67-69页 |
| 参考文献 | 第69-75页 |
| 附录A 硕士期间的主要研究成果 | 第75-77页 |
| 致谢 | 第77页 |