| 中文摘要 | 第7-11页 |
| abstract | 第11-14页 |
| 英文缩略词及中英文对照 | 第15-16页 |
| 第一章 引言 | 第16-25页 |
| 1.1 线粒体概述及线粒体基因组的结构 | 第16-18页 |
| 1.2 线粒体DNA的复制、转录及其调控机制 | 第18-20页 |
| 1.3 人线粒体转录终止因子3的研究进展 | 第20-21页 |
| 1.4 人类线粒体转录终止因子家族其它成员的研究进展 | 第21-22页 |
| 1.5 线粒体与肿瘤能量代谢的关系 | 第22-24页 |
| 1.6 本研究的目的和意义 | 第24-25页 |
| 第二章 人MTERF3在脑胶质瘤中的表达及其预后意义 | 第25-38页 |
| 1 实验材料 | 第25-26页 |
| 1.1 标本来源 | 第25-26页 |
| 1.2 实验主要试剂 | 第26页 |
| 1.3 实验主要仪器 | 第26页 |
| 2 实验方法 | 第26-30页 |
| 2.1 利用Oncomine数据库分析脑胶质瘤中hMTERF3的表达 | 第26页 |
| 2.2 TCGA数据资料收集 | 第26-27页 |
| 2.3 TCGA数据集筛选和临床病理学参数相关性分析 | 第27页 |
| 2.4 TCGA数据的统计学分析 | 第27-28页 |
| 2.5 临床石蜡切片 | 第28页 |
| 2.6 苏木素-伊红染色(HE染色) | 第28页 |
| 2.7 免疫组化 | 第28-29页 |
| 2.8 免疫组化结果判定 | 第29页 |
| 2.9 免疫组织化学数据的统计分析 | 第29-30页 |
| 3 实验结果 | 第30-35页 |
| 3.1 hMTERF3在所有肿瘤类型中的表达 | 第30-31页 |
| 3.2 hMTERF3在脑胶质瘤中的表达结果 | 第31页 |
| 3.3 hMTERF3在不同类型的脑胶质瘤组织和正常脑组织中表达的差异 | 第31-32页 |
| 3.4 hMTERF3的表达与脑胶质瘤临床病理相关性 | 第32-33页 |
| 3.5 hMTERF3的表达与脑胶质瘤患者预后的相关性 | 第33页 |
| 3.6 临床病理参数与脑胶质瘤患者预后的单因素和多因素分析 | 第33-34页 |
| 3.7 免疫组织化学技术检测脑胶质瘤及其正常脑组织中hMTERF3的表达 | 第34-35页 |
| 4 讨论 | 第35-37页 |
| 5 结论 | 第37-38页 |
| 第三章 hMTERF3基因克隆、载体构建及生物信息学分析 | 第38-55页 |
| 1.实验材料 | 第38-40页 |
| 1.1 菌株与质粒 | 第38页 |
| 1.2 实验主要试剂 | 第38-39页 |
| 1.3 实验主要仪器 | 第39页 |
| 1.4 主要试剂配制 | 第39-40页 |
| 2 实验方法 | 第40-46页 |
| 2.1 引物设计 | 第40页 |
| 2.2 hMTERF3基因的扩增及鉴定 | 第40-41页 |
| 2.2.1 hMTERF3基因的扩增 | 第40页 |
| 2.2.2 PCR产物琼脂糖凝胶电泳分析 | 第40-41页 |
| 2.3 真核表达载体p3×FLAG-CMV-14质粒的提取 | 第41页 |
| 2.4 重组质粒p3×FLAG-CMV-hMTERF3的构建与鉴定 | 第41-45页 |
| 2.4.1 真核表达载体p3×FLAG-CMV-14和目的基因hMTERF3的酶切 | 第41-42页 |
| 2.4.2 目的基因hMTERF3酶切与p3×FLAG-CMV-14质粒酶切片段胶回收 | 第42-43页 |
| 2.4.3 载体质粒p3×FLAG-CMV-14酶切产物与hMTERF3酶切产物的连接 | 第43页 |
| 2.4.4 载体质粒p3×FLAG-CMV-14与hMTERF3连接产物的转化 | 第43-44页 |
| 2.4.5 重组质粒p3×FLAG-CMV-hMTERF3的鉴定 | 第44-45页 |
| 2.5 hMTERF3基因及其编码蛋白质的生物信息学分析 | 第45-46页 |
| 2.5.1 hMTERF3蛋白序列分析 | 第45页 |
| 2.5.2 hMTERF3蛋白二级结构预测与结构域分析 | 第45页 |
| 2.5.3 hMTERF3蛋白的亚细胞定位分析 | 第45页 |
| 2.5.4 hMTERF3蛋白的相互作用分析 | 第45页 |
| 2.5.5 hMTERF3蛋白氨基酸序列比对与系统发育树的构建 | 第45-46页 |
| 2.5.6 hMTERF3蛋白的三级结构建模 | 第46页 |
| 3 实验结果 | 第46-52页 |
| 3.1 hMTERF3基因的PCR产物电泳分析 | 第46-47页 |
| 3.2 重组质粒p3×FLAG-CMV-hMTERF3的构建 | 第47页 |
| 3.3 重组质粒p3×FLAG-CMV-hMTERF3的鉴定 | 第47-48页 |
| 3.4 重组质粒p3×FLAG-CMV-hMTERF3的序列分析鉴定 | 第48页 |
| 3.5 hMTERF3蛋白理化性质的分析 | 第48-49页 |
| 3.6 hMTERF3蛋白的二级结构预测和功能域的分析 | 第49-50页 |
| 3.7 hMTERF3蛋白的亚细胞定位分析 | 第50页 |
| 3.8 hMTERF3蛋白的相互作用分析 | 第50页 |
| 3.9 hMTERF3蛋白的多重序列比对与系统发育树的构建 | 第50-51页 |
| 3.10 hMTERF3蛋白的三级结构建模 | 第51-52页 |
| 4 讨论 | 第52-54页 |
| 5 结论 | 第54-55页 |
| 第四章 过表达hMTERF3对脑胶质瘤U251细胞线粒体基因表达及细胞增殖的影响 | 第55-72页 |
| 1 实验材料 | 第55-57页 |
| 1.1 实验细胞株 | 第55页 |
| 1.2 实验主要试剂 | 第55页 |
| 1.3 实验主要仪器 | 第55-56页 |
| 1.4 主要试剂配制 | 第56-57页 |
| 2 实验方法 | 第57-65页 |
| 2.1 细胞培养 | 第57-58页 |
| 2.1.1 细胞复苏 | 第57页 |
| 2.1.2 细胞换液 | 第57页 |
| 2.1.3 细胞传代 | 第57-58页 |
| 2.1.4 细胞冻存 | 第58页 |
| 2.2 脑胶质瘤U251细胞株的转染 | 第58-59页 |
| 2.3 观察转染效率 | 第59页 |
| 2.4 细胞总DNA提取 | 第59页 |
| 2.5 半定量PCR检测线粒体DNA含量变化检测 | 第59-60页 |
| 2.6 Westernblot检测U251细胞中hMTERF3蛋白及线粒体ND1蛋白的表达 | 第60-63页 |
| 2.6.1 U251细胞总蛋白的抽提 | 第60页 |
| 2.6.2 U251细胞总蛋白浓度的测定 | 第60-61页 |
| 2.6.3 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第61-63页 |
| 2.7 MTT检测hMTERF3对细胞增殖的影响 | 第63-64页 |
| 2.8 流式细胞术检测hMTERF3对脑胶质瘤U251细胞周期的影响 | 第64-65页 |
| 3 实验结果 | 第65-70页 |
| 3.1 重组表达载体hMTERF3-FLAG质粒及空载体EGFP-FLAG-CMV质粒在U251细胞的转染效率 | 第65-66页 |
| 3.2 重组表达载体p3×FLAG-CMV-hMTERF3质粒在U251细胞中的表达 | 第66页 |
| 3.3 hMTERF3对线粒体DNA复制的影响 | 第66-67页 |
| 3.4 hMTERF3对线粒体编码ND1蛋白水平的影响 | 第67-68页 |
| 3.4.1 蛋白标准曲线的绘制 | 第67页 |
| 3.4.2 Westernblot检测hMTERF3对线粒体编码蛋白ND1水平的影响 | 第67-68页 |
| 3.5 过表达hMTERF3对U251细胞增殖的影响 | 第68-69页 |
| 3.6 过表达hMTERF3对U251细胞周期的影响 | 第69-70页 |
| 4 讨论 | 第70-71页 |
| 5 结论 | 第71-72页 |
| 攻读硕士学位期间发表论文 | 第72-73页 |
| 课题资助情况 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-82页 |
| 附录I 溶液的配制方法 | 第82-85页 |
| 附录II 测序报告 | 第85-87页 |
| 致谢 | 第87页 |
