| 摘要 | 第4-6页 |
| abstract | 第6-7页 |
| 1 文献综述 | 第18-30页 |
| 1.1 肉羊肌肉组织发育的研究进展 | 第18-21页 |
| 1.1.1 羊肉与肉羊产业 | 第18页 |
| 1.1.2 肌肉组织的发育 | 第18-19页 |
| 1.1.3 肌肉发育相关信号通路 | 第19-21页 |
| 1.2 microRNAs的研究进展 | 第21-26页 |
| 1.2.1 microRNAs的形成机制 | 第22-23页 |
| 1.2.2 microRNAs的作用原理 | 第23页 |
| 1.2.3 microRNAs在骨骼肌发育的调控作用 | 第23-26页 |
| 1.2.4 miR-487b-3p的研究进展 | 第26页 |
| 1.3 miR-487b-3p预测靶基因的研究进展 | 第26-28页 |
| 1.3.1 IRS1的研究进展 | 第26-27页 |
| 1.3.2 ITGA6的研究进展 | 第27页 |
| 1.3.3 ZMYND8的研究进展 | 第27-28页 |
| 1.4 本研究的目的和意义 | 第28-30页 |
| 2 miR-487b-3p组织表达谱研究 | 第30-40页 |
| 2.1 实验材料的采集 | 第30页 |
| 2.2 实验所用仪器与试剂 | 第30页 |
| 2.3 组织表达谱分析方法 | 第30-33页 |
| 2.3.1 miR-487b-3p序列保守性分析 | 第31页 |
| 2.3.2 不同生长时期、不同组织总RNA提取 | 第31页 |
| 2.3.3 miR-487b-3p引物设计 | 第31页 |
| 2.3.4 不同生长时期、不同组织的cDNA合成 | 第31-32页 |
| 2.3.5 实时荧光定量PCR | 第32-33页 |
| 2.4 结果与分析 | 第33-37页 |
| 2.4.1 miR-487b-3p序列保守性分析 | 第33-34页 |
| 2.4.2 miR-487b-3p实时荧光定量PCR结果 | 第34-37页 |
| 2.5 讨论 | 第37-38页 |
| 2.6 小结 | 第38-40页 |
| 3 miR-487b-3p对成肌细胞增殖的影响 | 第40-60页 |
| 3.1 实验材料 | 第40页 |
| 3.2 实验所用仪器与试剂 | 第40页 |
| 3.3 实验方法 | 第40-47页 |
| 3.3.1 徐淮山羊肌肉组织DNA的提取 | 第41页 |
| 3.3.2 实验所用引物的设计 | 第41页 |
| 3.3.3 pcDNA3.1(+)-miR-487b-3p载体构建 | 第41-44页 |
| 3.3.4 Mimics、Inhibitors和pcDNA3.1(+)-miR-487b-3p效率探究 | 第44-45页 |
| 3.3.5 小鼠成肌细胞系(C2C12)的培养 | 第45页 |
| 3.3.6 细胞铺板和转染 | 第45-46页 |
| 3.3.7 实时荧光定量PCR | 第46页 |
| 3.3.8 Westernblot实验 | 第46页 |
| 3.3.9 CCK-8实验 | 第46-47页 |
| 3.3.10 EdU(5-Ethynyl-2’-deoxyuridine)实验 | 第47页 |
| 3.4 结果与分析 | 第47-57页 |
| 3.4.1 pcDNA3.1(+)-miR-487b-3p过表达载体的构建 | 第47-48页 |
| 3.4.2 miR-487b-3poligo,pcDNA3.1(+)-miR-487b-3p表达效率 | 第48-50页 |
| 3.4.3 miR-487b-3p抑制C2C12成肌细胞增殖标志基因的表达 | 第50-53页 |
| 3.4.4 miR-487b-3p抑制C2C12成肌细胞增殖活力 | 第53-54页 |
| 3.4.5 miR-487b-3p抑制C2C12成肌细胞增殖 | 第54-57页 |
| 3.5 讨论 | 第57-58页 |
| 3.6 小结 | 第58-60页 |
| 4 miR-487b-3p对成肌细胞分化的影响 | 第60-72页 |
| 4.1 实验材料 | 第60页 |
| 4.2 实验所用仪器与试剂 | 第60页 |
| 4.3 实验方法 | 第60-62页 |
| 4.3.1 C2C12成肌细胞的培养和诱导分化 | 第61页 |
| 4.3.2 实验所用引物的设计 | 第61页 |
| 4.3.3 细胞铺板和转染 | 第61页 |
| 4.3.4 实时荧光定量PCR | 第61-62页 |
| 4.3.5 Westernblot实验 | 第62页 |
| 4.4 结果与分析 | 第62-69页 |
| 4.4.1 C2C12成肌细胞分化形态和miR-487b-3p表达趋势 | 第62-64页 |
| 4.4.2 miR-487b-3p抑制C2C12成肌细胞分化关键调控因子mRNA表达 | 第64-66页 |
| 4.4.3 miR-487b-3p抑制C2C12成肌细胞分化关键调控因子蛋白表达 | 第66-69页 |
| 4.5 讨论 | 第69-70页 |
| 4.6 小结 | 第70-72页 |
| 5 miR-487b-3p靶基因预测和验证 | 第72-86页 |
| 5.1 实验材料 | 第72页 |
| 5.2 实验所用仪器与试剂 | 第72页 |
| 5.3 实验方法 | 第72-77页 |
| 5.3.1 miR-487b-3p靶基因的预测 | 第72-73页 |
| 5.3.2 徐淮山羊肌肉组织DNA的提取 | 第73页 |
| 5.3.3 载体构建引物的设计 | 第73页 |
| 5.3.4 靶基因野生型和突变型载体构建 | 第73-75页 |
| 5.3.5 靶基因野生型和突变型质粒提取和细胞转染 | 第75页 |
| 5.3.6 双荧光素酶报告基因实验 | 第75-76页 |
| 5.3.7 靶基因IRS1序列保守性分析 | 第76页 |
| 5.3.8 实时荧光定量PCR | 第76页 |
| 5.3.9 Westernblot实验 | 第76-77页 |
| 5.4 结果与分析 | 第77-84页 |
| 5.4.1 miR-487b-3p靶基因的预测结果 | 第77页 |
| 5.4.2 双荧光酶报告基因载体的成功构建 | 第77-79页 |
| 5.4.3 miR-487b-3p与预测靶基因之间的靶向关系 | 第79-81页 |
| 5.4.4 miR-487b-3p种子序列及IRS13’UTR区保守性分析 | 第81-82页 |
| 5.4.5 miR-487b-3p过表达或者抑制对IRS1基因表达的影响 | 第82-84页 |
| 5.5 讨论 | 第84-85页 |
| 5.6 小结 | 第85-86页 |
| 6 干扰IRS1对成肌细胞增殖、分化的影响 | 第86-96页 |
| 6.1 实验材料 | 第86页 |
| 6.2 实验所用仪器与试剂 | 第86页 |
| 6.3 实验方法 | 第86-88页 |
| 6.3.1 C2C12成肌细胞的培养及诱导增殖、分化 | 第86-87页 |
| 6.3.2 细胞铺板和转染 | 第87页 |
| 6.3.3 实时荧光定量PCR | 第87页 |
| 6.3.4 Westernblot实验 | 第87-88页 |
| 6.3.5 EdU(5-Ethynyl-2’-deoxyuridine)实验 | 第88页 |
| 6.4 结果与分析 | 第88-93页 |
| 6.4.1 si-IRS1-3抑制IRS1mRNA表达 | 第88-89页 |
| 6.4.2 si-IRS1-3抑制IRS1蛋白表达 | 第89-90页 |
| 6.4.3 干扰IRS1抑制C2C12成肌细胞增殖 | 第90-92页 |
| 6.4.4 干扰IRS1抑制C2C12成肌细胞分化 | 第92-93页 |
| 6.5 讨论 | 第93-94页 |
| 6.6 小结 | 第94-96页 |
| 7 结论与创新点 | 第96-98页 |
| 7.1 结论 | 第96页 |
| 7.2 创新点 | 第96-97页 |
| 7.3 下一步研究 | 第97-98页 |
| 参考文献 | 第98-110页 |
| 附录 | 第110-124页 |
| 附录1 实验所用仪器与试剂 | 第110-113页 |
| 附录2 组织和细胞总RNA的提取 | 第113-114页 |
| 附录3 肌肉组织DNA的提取 | 第114-115页 |
| 附录4 转化实验 | 第115页 |
| 附录5 细胞转染实验 | 第115-116页 |
| 附录6 细胞总蛋白提取实验 | 第116页 |
| 附录7 BCA蛋白浓度测定实验 | 第116-117页 |
| 附录8 Westernblot实验 | 第117-119页 |
| 附录9 EdU细胞荧光实验 | 第119-120页 |
| 附录10质粒提取实验 | 第120-121页 |
| 附录11 双荧光素酶报告基因实验 | 第121-124页 |
| 致谢 | 第124-126页 |
| 作者简介 | 第126-128页 |
| 学位论文数据集 | 第128页 |
