| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 中英符号缩略词表 | 第8-11页 |
| 前言 | 第11-12页 |
| 第一章 文章综述 | 第12-23页 |
| 第一节 低温胁迫对植物的影响 | 第12-15页 |
| 1.1 低温胁迫对植物膜的危害 | 第12-13页 |
| 1.2 低温胁迫对植物光合作用的影响 | 第13-14页 |
| 1.3 低温胁迫对植物呼吸作用的影响 | 第14-15页 |
| 第二节 天山雪莲抗逆性研究 | 第15-20页 |
| 2.1 天山雪莲简介 | 第15页 |
| 2.2 克隆天山雪莲基因组中与植物抗寒相关基因 | 第15-16页 |
| 2.3 天山雪莲抗寒基因的相关研究 | 第16-17页 |
| 2.4 植物金属硫蛋白（MTs）的功能研究 | 第17-18页 |
| 2.5 结合电导法与Logistic方程测定植物组织半致死温度的研究 | 第18-20页 |
| 第三节 基因沉默现象的研究 | 第20-22页 |
| 3.1 转基因沉默现象及其危害 | 第20页 |
| 3.2 基因沉默的机理 | 第20页 |
| 3.3 转录水平上的基因沉默(TGS) | 第20页 |
| 3.4 转录后水平上的基因沉默(PTGS) | 第20-21页 |
| 3.5 应对基因沉默的策略 | 第21-22页 |
| 第四节 本研究的目的、意义及研究内容 | 第22-23页 |
| 4.1 目的与意义 | 第22页 |
| 4.2 研究内容 | 第22页 |
| 4.3 技术路线 | 第22-23页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第23-39页 |
| 第一节 天山雪莲cDNA文库的构建 | 第23-31页 |
| 1 实验材料 | 第23页 |
| 1.1 植物材料 | 第23页 |
| 1.2 菌株与质粒 | 第23页 |
| 1.3 生物酶以及试剂盒 | 第23页 |
| 1.4 主要仪器设备 | 第23页 |
| 2 实验方法 | 第23-31页 |
| 2.1 提取天山雪莲RNA | 第23-25页 |
| 2.2 天山雪莲cDNA的合成 | 第25页 |
| 2.3 天山雪莲双链cDNA浓缩 | 第25-26页 |
| 2.4 天山雪莲cDNA片段的均一化处理 | 第26页 |
| 2.5 均一化处理后cDNA片段扩增 | 第26-27页 |
| 2.6 均一化处理后cDNA片段扩增产物回收 | 第27页 |
| 2.7 天山雪莲cDNA的片段分级 | 第27-28页 |
| 2.8 DNA重组反应 | 第28-31页 |
| 第二节 棉花愈伤组织半致死温度测定及抗寒突变体的筛选 | 第31-34页 |
| 1 实验材料 | 第31页 |
| 1.1 植物材料 | 第31页 |
| 1.2 菌株与质粒 | 第31页 |
| 1.3 主要仪器设备 | 第31页 |
| 2 实验方法 | 第31-34页 |
| 2.1 棉花无菌苗培养 | 第31页 |
| 2.2 棉花愈伤组织培养 | 第31-32页 |
| 2.3 棉花愈伤组织半致死温度（T50）的测定 | 第32页 |
| 2.4 获取转基因棉花愈伤组织 | 第32-33页 |
| 2.5 转基因棉花愈伤组织抗寒突变体的筛选 | 第33-34页 |
| 第三节 天山雪莲抗寒基因的克隆与分析 | 第34-39页 |
| 1 实验材料 | 第34页 |
| 1.1 植物材料 | 第34页 |
| 1.2 生物酶以及试剂盒 | 第34页 |
| 1.3 主要仪器设备 | 第34页 |
| 2 实验方法 | 第34-39页 |
| 2.1 天山雪莲抗寒基因的克隆 | 第34-36页 |
| 2.2 天山雪莲SikMT2基因的生物信息学及表达分析 | 第36-39页 |
| 第三章 结果与分析 | 第39-48页 |
| 第一节 天山雪莲cDNA文库的构建 | 第39-41页 |
| 1.1 天山雪莲总RNA的提取及mRNA分离 | 第39页 |
| 1.2 天山雪莲cDNA的合成 | 第39页 |
| 1.3 天山雪莲cDNA片段的均一化处理 | 第39-40页 |
| 1.4 天山雪莲cDNA的片段分级 | 第40页 |
| 1.5 文库的质量评价 | 第40-41页 |
| 第二节 棉花愈伤组织半致死温度测定 | 第41-42页 |
| 2.1 培养棉花愈伤组织 | 第41页 |
| 2.2 测定棉花愈伤组织的电导率 | 第41-42页 |
| 第三节 天山雪莲抗寒基因的克隆与分析 | 第42-48页 |
| 3.1 转基因棉花愈伤组织半致死温度处理 | 第42-43页 |
| 3.2 天山雪莲抗寒基因的克隆 | 第43页 |
| 3.3 天山雪莲抗寒基因的生物信息学分析 | 第43-46页 |
| 3.4 天山雪莲SikMT2基因非生物胁迫响应的Real time-PCR分析 | 第46-48页 |
| 第四章 结论与讨论 | 第48-50页 |
| 4.1 结合SMART技术与均一化技术构建天山雪莲cDNA文库的优点 | 第48页 |
| 4.2 结合电导法与Logistic方程测定植物半致死温度 | 第48页 |
| 4.3 天山雪莲SikMT2蛋白的功能分析 | 第48-50页 |
| 参考文献 | 第50-54页 |
| 附录 实验常用溶液与培养基 | 第54-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
| 作者简介 | 第57-58页 |
| 附件 | 第58页 |
