| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-13页 |
| 第一章 序言 | 第13-31页 |
| ·蓝藻分子遗传学的研究概况 | 第13-16页 |
| ·蓝藻基因组的研究概况 | 第13-14页 |
| ·螺旋藻基因的克隆 | 第14-16页 |
| ·核糖体蛋白基因及蛋白合成延长因子基因的克隆 | 第14-15页 |
| ·与螺旋藻信号转导有关的基因的克隆 | 第15页 |
| ·与氨基酸代谢有关的基因的克隆 | 第15-16页 |
| ·丝氨酸酯酶 | 第15-16页 |
| ·谷氨酰胺合成酶 | 第16页 |
| ·与螺旋藻光合作用及色素合成有关基因的克隆 | 第16页 |
| ·蓝藻分子系统学研究进展 | 第16-21页 |
| ·蓝藻分子系统学 | 第16-18页 |
| ·分子系统学 | 第16-17页 |
| ·蓝藻 | 第17-18页 |
| ·蓝藻分子系统学 | 第18页 |
| ·蓝藻分子系统学研究方法及应用 | 第18-21页 |
| ·同工酶电泳分析 | 第18-19页 |
| ·藻胆蛋白组成 | 第19页 |
| ·免疫学的研究 | 第19页 |
| ·DNA 碱基组成 | 第19页 |
| ·DNA 指纹图谱 | 第19-20页 |
| ·DNA-DNA 杂交 | 第20页 |
| ·限制性内切酶片断长度多态性(RFLP) | 第20页 |
| ·随机扩增多态性DNA(RAPD) | 第20页 |
| ·16SrRNA 基因分析 | 第20-21页 |
| ·其他分析方法 | 第21页 |
| ·系统发育重建方法 | 第21-24页 |
| ·距离法 | 第22页 |
| ·最大简约法 | 第22页 |
| ·最大似然法 | 第22-23页 |
| ·贝叶斯推测 | 第23-24页 |
| ·藻胆蛋白及裂合酶基因的研究进展 | 第24-28页 |
| ·藻胆蛋白研究进展 | 第24-26页 |
| ·藻胆蛋白的光谱及荧光性质 | 第26页 |
| ·藻胆色素的性质 | 第26-27页 |
| ·藻胆蛋白裂合酶基因研究进展 | 第27-28页 |
| ·课题提出的目的和意义 | 第28-31页 |
| ·螺旋藻的分类 | 第28-29页 |
| ·课题提出的意义 | 第29-31页 |
| 第二章 螺旋藻裂合酶 cpcE-F 基因的克隆、分析和系统进化研究 | 第31-72页 |
| ·实验材料 | 第32-35页 |
| ·菌种及质粒 | 第32页 |
| ·常用仪器统计 | 第32-33页 |
| ·常用试剂统计 | 第33-34页 |
| ·常用的培养基配方及试剂配制 | 第34-35页 |
| ·实验方法 | 第35-45页 |
| ·藻丝的培养和收集 | 第35页 |
| ·CTAB 新法提取螺旋藻总DNA | 第35-36页 |
| ·提取的总DNA 的检测 | 第36-37页 |
| ·低熔点琼脂糖凝胶电泳检测 | 第36-37页 |
| ·低熔点琼脂糖凝胶电泳胶的制备 | 第36页 |
| ·电泳检测 | 第36-37页 |
| ·测定OD 值 | 第37页 |
| ·浓度的检测 | 第37页 |
| ·纯度的检测 | 第37页 |
| ·进化分析所用基因的获得 | 第37-38页 |
| ·凝胶回收步骤 | 第38-39页 |
| ·纯化的PCR 产物与T-载体的连接 | 第39-41页 |
| ·pMD18-T simple vector 简介 | 第39-41页 |
| ·纯化的PCR 产物与载体的连接 | 第41页 |
| ·热击法转化大肠杆菌DH5α | 第41-42页 |
| ·热击法感受态细胞的制备 | 第41-42页 |
| ·热击法转化大肠杆菌DH5α | 第42页 |
| ·阳性克隆的挑选 | 第42-43页 |
| ·质粒提取 | 第42-43页 |
| ·阳性克隆的检测 | 第43页 |
| ·电泳检测 | 第43页 |
| ·序列测定 | 第43页 |
| ·序列分析 | 第43-45页 |
| ·结果与讨论 | 第45-72页 |
| ·微藻总DNA 的提取 | 第45-46页 |
| ·进化分析所用目的基因的结果 | 第46-48页 |
| ·PCR 产物(cpcE-F 基因)与T 载体的连接与检测 | 第48-49页 |
| ·质粒PMD18-T-cpcE-F 的提取 | 第49页 |
| ·序列测定和分析 | 第49-72页 |
| ·cpcE-F 基因的核苷酸序列 | 第49-51页 |
| ·cpcE-F 基因开放读码框(ORF)和GC 含量分析 | 第51-54页 |
| ·cpcE-F 基因的氨基酸序列推导及密码子使用情况 | 第54-59页 |
| ·序列的相似性和同源性 | 第59-67页 |
| ·二级结构预测及分析 | 第67-69页 |
| ·系统发育分析 | 第69-72页 |
| 第三章 藻蓝蛋白裂合酶基因在大肠杆菌中的表达研究 | 第72-94页 |
| ·实验材料 | 第72-76页 |
| ·菌种及质粒 | 第72-73页 |
| ·常用仪器统计 | 第73页 |
| ·常用试剂统计 | 第73页 |
| ·常用的培养基配方及试剂配制 | 第73-76页 |
| ·实验方法 | 第76-86页 |
| ·藻丝的培养和收集 | 第76页 |
| ·CTAB 新法提取螺旋藻总DNA | 第76页 |
| ·提取的总DNA 的电泳检测 | 第76页 |
| ·质粒构建所用目的基因的获得 | 第76-80页 |
| ·结构基因cpcA 的获得 | 第77页 |
| ·藻胆色素合成所需酶的基因pcyA 的获得 | 第77-78页 |
| ·藻胆色素合成所需酶的基因hox1 的获得 | 第78页 |
| ·Spirulina platensis FACH8314 裂合酶cpcE_(314) 基因的获得 | 第78-79页 |
| ·Spirulina platensis FACH8314 裂合酶cpcF_(314) 基因的获得 | 第79页 |
| ·Spirulina subsalsa FACH8351 裂合酶cpcE_(351) 基因的获得 | 第79-80页 |
| ·Spirulina subsalsa FACH8351 裂合酶cpcF_(351) 基因的获得 | 第80页 |
| ·目的片段的电泳检测、回收和连接检测 | 第80页 |
| ·电击法转化大肠杆菌BL21(DE3) | 第80-82页 |
| ·电击小杯的预处理 | 第81页 |
| ·电转化法大肠杆菌感受态的制备 | 第81页 |
| ·电击法转化大肠杆菌BL21(DE3) | 第81-82页 |
| ·裂合酶cpcE_(314/351)、cpcF_(314/351) 基因在大肠杆菌中的功能认证 | 第82-86页 |
| ·表达载体的构建 | 第82-84页 |
| ·蛋白的表达 | 第84-85页 |
| ·重组蛋白的破碎 | 第85页 |
| ·SDS-PAGE 电泳、Western Blotting 及光谱检测 | 第85-86页 |
| ·结果与讨论 | 第86-94页 |
| ·藻蓝蛋白α亚基cpcA 基因的获得 | 第86页 |
| ·铁氧蛋白氧化还原酶pcyA 基因的获得 | 第86-87页 |
| ·血红素氧化酶hox1 基因的获得 | 第87-88页 |
| ·裂合酶cpcE_(314) 基因的获得 | 第88页 |
| ·裂合酶cpcF_(314) 基因的获得 | 第88-89页 |
| ·裂合酶cpcE_(351) 基因的获得 | 第89页 |
| ·裂合酶cpcF_(351) 基因的获得 | 第89-90页 |
| ·基因表达结果 | 第90-94页 |
| ·表达质粒pET-hox1-pcyA 的检测 | 第90页 |
| ·表达质粒pACYCDuet-cpcA-cpcE-cpcF 的检测 | 第90-91页 |
| ·蛋白表达结果 | 第91-92页 |
| ·表达蛋白的荧光光谱分析 | 第92-94页 |
| 全文结论 | 第94-95页 |
| 参考文献 | 第95-101页 |
| 附录 | 第101-105页 |
| 致谢 | 第105-106页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第106-107页 |
