| 摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 1 前言 | 第11-19页 |
| 1.1 鼠肝炎病毒研究进展 | 第11页 |
| 1.2 鼠肝炎病毒的结构特征 | 第11-12页 |
| 1.3 鼠肝炎病毒的分子特征 | 第12-13页 |
| 1.4 鼠肝炎病毒理化特征 | 第13页 |
| 1.5 鼠肝炎流行病学 | 第13-14页 |
| 1.6 临床症状及病理变化 | 第14页 |
| 1.7 鼠肝炎病毒对实验的影响 | 第14-15页 |
| 1.8 诊断方法的研究 | 第15-17页 |
| 1.9 预防和控制 | 第17页 |
| 1.10 研究目的和意义 | 第17-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-29页 |
| 2.1 实验材料 | 第19-20页 |
| 2.1.1 病毒株、细胞株、菌株 | 第19页 |
| 2.1.2 实验动物 | 第19页 |
| 2.1.3 主要工具酶、抗体及分子生物学试剂盒 | 第19页 |
| 2.1.4 主要药品及试剂 | 第19-20页 |
| 2.1.5 主要实验仪器设备 | 第20页 |
| 2.2 试验方法 | 第20-29页 |
| 2.2.1 MHV-A59 N基因的获得及原核表达质粒pET-32a-N的构建 | 第20-23页 |
| 2.2.2 重组蛋白的表达 | 第23-24页 |
| 2.2.3 MHV N蛋白多克隆抗体的制备 | 第24-26页 |
| 2.2.4 MHV间接ELISA检测方法的建立 | 第26-28页 |
| 2.2.5 MHV间接ELISA检测方法的初步应用 | 第28-29页 |
| 3 实验结果 | 第29-40页 |
| 3.1 MHV-N蛋白多克隆抗体制备 | 第29-35页 |
| 3.1.1 原核表达质粒pET-32a-N的构建 | 第29-31页 |
| 3.1.2 MHGN蛋白的原核表达 | 第31-33页 |
| 3.1.3 原核表达蛋白的纯化 | 第33页 |
| 3.1.4 多抗血清检测 | 第33-35页 |
| 3.2 间接ELISA检测方法的建立 | 第35-39页 |
| 3.2.1 抗原最适浓度 | 第35页 |
| 3.2.2 血清最适浓度 | 第35-36页 |
| 3.2.3 血清最适作用时间 | 第36页 |
| 3.2.4 酶标抗体最佳作用浓度 | 第36页 |
| 3.2.5 酶标抗体最佳作用时间 | 第36-37页 |
| 3.2.6 封闭液的选择 | 第37页 |
| 3.2.7 敏感性结果 | 第37-38页 |
| 3.2.8 稳定性试验结果 | 第38页 |
| 3.2.9 与间接免疫荧光比较 | 第38-39页 |
| 3.3 间接ELISA检测方法的应用 | 第39-40页 |
| 4 讨论 | 第40-43页 |
| 4.1 表达蛋白基因的选择 | 第40页 |
| 4.2 连接转化条件的选择 | 第40页 |
| 4.3 原核表达载体的选择 | 第40-41页 |
| 4.4 诱导表达条件的优化 | 第41页 |
| 4.5 蛋白的纯化 | 第41-42页 |
| 4.6 ELISA检测方法条件的摸索 | 第42-43页 |
| 5 结论 | 第43-44页 |
| 致谢 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-49页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第49页 |