| 摘要 | 第8-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 符号说明和缩略词 | 第13-15页 |
| 第1章 文献综述 | 第15-27页 |
| 1 聚酮类化合物及其挖掘 | 第15-18页 |
| 1.1 微生物蕴藏丰富的天然产物 | 第15-16页 |
| 1.2 聚酮类天然产物 | 第16页 |
| 1.3 天然产物的挖掘 | 第16-18页 |
| 2 安莎霉素的研究进展 | 第18-27页 |
| 2.1 安莎霉素的种类及活性 | 第18-21页 |
| 2.2 安莎霉素的生物合成 | 第21-27页 |
| 第2章 菌株遗传操作体系的摸索 | 第27-38页 |
| 1 实验材料和试剂 | 第27-28页 |
| 1.1 菌株和质粒 | 第27页 |
| 1.2 培养基 | 第27页 |
| 1.3 试剂 | 第27-28页 |
| 1.4 仪器设备及耗材 | 第28页 |
| 2 实验方法 | 第28-32页 |
| 2.1 培养条件优化 | 第28-29页 |
| 2.2 抗生素敏感性测定 | 第29-30页 |
| 2.3 遗传操作条件的摸索 | 第30-32页 |
| 3 实验结果与讨论 | 第32-36页 |
| 3.1 培养条件优化 | 第32-33页 |
| 3.2 抗生素敏感性检测 | 第33-34页 |
| 3.3 大肠杆菌为媒介的接合转移条件的确定 | 第34-36页 |
| 4 总结 | 第36-38页 |
| 第3章 三株放线菌中沉默五酮安莎基因簇的激活 | 第38-67页 |
| 1 实验材料和试剂 | 第38-40页 |
| 1.1 菌株和质粒 | 第38-39页 |
| 1.2 培养基 | 第39页 |
| 1.3 试剂(盒) | 第39页 |
| 1.4 仪器设备及耗材 | 第39-40页 |
| 2 实验方法 | 第40-50页 |
| 2.1 本章使用的引物 | 第40页 |
| 2.2 pSET152ER-regulator整合型重组质粒的构建 | 第40-43页 |
| 2.3 pSET152ER-regulator~1-kasOp~*-regulator~2的构建 | 第43-44页 |
| 2.4 大肠杆菌-放线菌属间接合转移 | 第44-45页 |
| 2.5 过表达突变株的筛选验证 | 第45页 |
| 2.6 pOJ260a△as敲除质粒的构建 | 第45-47页 |
| 2.7 pOJ260a△as::jlmD酰胺合酶基因原位替换质粒的构建 | 第47-48页 |
| 2.8 pJTU1278-Cas9△as:jlmD酰胺合酶基因原位替换质粒的构建 | 第48-49页 |
| 2.9 突变株及野生型的发酵和HPLC检测 | 第49-50页 |
| 3 实验结果与讨论 | 第50-65页 |
| 3.1 生物信息学分析 | 第50-52页 |
| 3.2 S035-SL分到五酮安莎新骨架aminoansamycins A-G | 第52-60页 |
| 3.4 S033-SARP中五酮安莎新骨架的挖掘 | 第60-64页 |
| 3.5 S046-LuxR中新颖五酮安莎霉素的挖掘 | 第64-65页 |
| 4 总结 | 第65-67页 |
| 第4章 链霉菌S051中Naphthgeranine A的生物合成研究 | 第67-78页 |
| 1 实验材料和试剂 | 第67-68页 |
| 1.1 菌株和质粒 | 第67页 |
| 1.2 培养基 | 第67页 |
| 1.3 试剂、试剂盒及限制酶 | 第67-68页 |
| 1.4 仪器设备及耗材 | 第68页 |
| 2 实验方法 | 第68-71页 |
| 2.1 本章使用的引物 | 第68页 |
| 2.2 S051基因簇中SARP基因pSET152ER整合型重组质粒的构建 | 第68页 |
| 2.3 大肠杆菌-放线菌属间接合转移 | 第68页 |
| 2.4 大规模发酵和天然产物分离纯化 | 第68-69页 |
| 2.5 反转录PCR | 第69-71页 |
| 3 实验结果与讨论 | 第71-76页 |
| 3.1 突变株验证及发酵小试 | 第71-72页 |
| 3.2 S051-SARP中Naphthgeranine A的分离和结构鉴定 | 第72-75页 |
| 3.3 SARP(nph R)正调控化合物Naphthgeranine A的生物合成 | 第75-76页 |
| 4 总结 | 第76-78页 |
| 第5章 链霉菌S035中其它新颖次级代谢基因簇的激活 | 第78-89页 |
| 1 实验材料和试剂 | 第78-79页 |
| 1.1 菌株和质粒 | 第78-79页 |
| 1.2 培养基 | 第79页 |
| 1.3 试剂(盒) | 第79页 |
| 1.4 仪器设备及耗材 | 第79页 |
| 2 实验方法 | 第79-83页 |
| 2.1 本章使用的引物 | 第79页 |
| 2.2 S035的全基因组检测和转录组检测 | 第79页 |
| 2.3 S035基因组文库的构建 | 第79-83页 |
| 2.4 pSET152整合型重组质粒的构建 | 第83页 |
| 2.5 大肠杆菌-放线菌属间接合转移 | 第83页 |
| 2.6 过表达突变株的验证 | 第83页 |
| 2.7 突变株及野生型的发酵和HPLC检测 | 第83页 |
| 3 实验结果与讨论 | 第83-87页 |
| 3.1 S035的全基因组测序 | 第83-84页 |
| 3.2 S035的转录组检测 | 第84-85页 |
| 3.3 S035中5个新颖次级代谢生物合成基因簇 | 第85-86页 |
| 3.4 过表达突变株的验证 | 第86-87页 |
| 3.5 过表达突变株代谢物的HPLC检测 | 第87页 |
| 4 总结 | 第87-89页 |
| 全文总结和展望 | 第89-91页 |
| 附录Ⅰ S002/S033/S035/S046/LC6/S051 AHBA合酶基因序列 | 第91-94页 |
| 附录Ⅱ S002/S033/S035/S046/LC6酰胺合酶基因序列 | 第94-96页 |
| 附录Ⅲ 本研究论文中涉及的培养基 | 第96-98页 |
| 附录Ⅳ 本研究论文中使用的试剂(盒) | 第98-100页 |
| 附录Ⅴ 本研究论文中涉及的仪器及设备 | 第100-101页 |
| 附录Ⅵ 本研究论文中涉及的引物序列 | 第101-103页 |
| 参考文献 | 第103-109页 |
| 致谢 | 第109-110页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第110页 |
