| 摘要 | 第7-10页 |
| ABSTRACT | 第10-13页 |
| 缩略词表 | 第14-15页 |
| 第1章 前言 | 第15-40页 |
| 1.1 尼古丁的化学结构与性质 | 第15页 |
| 1.2 尼古丁的危害与污染现状 | 第15-17页 |
| 1.3 尼古丁的降解研究进展 | 第17-24页 |
| 1.3.1 尼古丁在人体中的降解代谢 | 第17-18页 |
| 1.3.2 尼古丁在植物中的降解代谢 | 第18页 |
| 1.3.3 尼古丁在微生物中的降解代谢 | 第18-24页 |
| 1.4 尼古丁去甲基化反应机制研究进展 | 第24-25页 |
| 1.4.1 甲基转移假说 | 第24页 |
| 1.4.2 氧化去甲基假说 | 第24-25页 |
| 1.4.3 酶促氧化去甲基学说 | 第25页 |
| 1.5 细胞色素P450研究进展 | 第25-28页 |
| 1.6 膜蛋白表达研究进展 | 第28-32页 |
| 1.6.1 大肠杆菌表达系统 | 第29页 |
| 1.6.2 酵母表达系统 | 第29-30页 |
| 1.6.3 杆状病毒/昆虫细胞表达系统 | 第30页 |
| 1.6.4 哺乳表达系统 | 第30页 |
| 1.6.5 无细胞表达系统 | 第30-32页 |
| 1.7 细胞色素P450的表达策略研究进展 | 第32-38页 |
| 1.7.1 N-端修饰 | 第32-34页 |
| 1.7.2 同义突变 | 第34-35页 |
| 1.7.3 第二个密码子突变以编码丙氨酸 | 第35页 |
| 1.7.4 载体构建 | 第35-36页 |
| 1.7.5 分子伴侣系统 | 第36-37页 |
| 1.7.6 外界因素 | 第37-38页 |
| 1.8 本论文的意义及研究内容 | 第38-40页 |
| 第2章 CYP与CPR的基因克隆与载体构建 | 第40-51页 |
| 2.1 材料与方法 | 第42-48页 |
| 2.1.1 菌株、质粒和培养基 | 第42页 |
| 2.1.2 试剂和仪器 | 第42-43页 |
| 2.1.3 cyp与cpr的基因克隆 | 第43-44页 |
| 2.1.4 RNA提取与纯化 | 第44-45页 |
| 2.1.5 重组质粒构建与筛选鉴定 | 第45-48页 |
| 2.2 结果与讨论 | 第48-51页 |
| 2.2.1 目的基因扩增 | 第48页 |
| 2.2.2 重组质粒构建与筛选鉴定 | 第48-49页 |
| 2.2.3 DNA 测序 | 第49-50页 |
| 2.2.4 讨论 | 第50-51页 |
| 第3章 CYP和CPR在大肠杆菌中的表达 | 第51-60页 |
| 3.1 材料与方法 | 第51-54页 |
| 3.1.1 菌株、质粒和培养基 | 第51页 |
| 3.1.2 试剂和仪器 | 第51页 |
| 3.1.3 目的蛋白的诱导表达 | 第51-52页 |
| 3.1.4 粗酶的制备 | 第52页 |
| 3.1.5 活性分析 | 第52-54页 |
| 3.2 结果和讨论 | 第54-60页 |
| 3.2.1 目的蛋白的表达及检测 | 第54-56页 |
| 3.2.2 CYP的活性检测 | 第56页 |
| 3.2.3 CPR的活性检测 | 第56-57页 |
| 3.2.4 尼古丁降解活性检测 | 第57-58页 |
| 3.2.5 CYP8的催化活性分析 | 第58-59页 |
| 3.2.6 讨论 | 第59-60页 |
| 第4章 CYP1的N-端修饰与表达及尼古丁去甲基酶的氨基酸序列分析 | 第60-71页 |
| 4.1 材料和方法 | 第61-64页 |
| 4.1.1 菌株、质粒和培养基 | 第61-62页 |
| 4.1.2 试剂和仪器 | 第62页 |
| 4.1.3 CYP1的N-端修饰载体构建 | 第62-64页 |
| 4.1.4 目的蛋白的表达和检测 | 第64页 |
| 4.1.5 CYP1的活性检测 | 第64页 |
| 4.1.6 尼古丁去甲基酶的氨基酸序列分析 | 第64页 |
| 4.2 结果和讨论 | 第64-71页 |
| 4.2.1 CYP1的跨膜结构域预测 | 第64-65页 |
| 4.2.2 CYP1 N-端的载体构建 | 第65-67页 |
| 4.2.3 目的蛋白的表达检测以及活性检测 | 第67-68页 |
| 4.2.4 尼古丁去甲基酶的氨基酸序列分析 | 第68-70页 |
| 4.2.5 讨论 | 第70-71页 |
| 全文总结 | 第71-73页 |
| 参考文献 | 第73-88页 |
| 致谢 | 第88-89页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第89页 |