| 中文摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 1 前言 | 第13-26页 |
| 1.1 植物开花时间调控 | 第13-18页 |
| 1.1.1 模式植物拟南芥开花时间调控 | 第13-18页 |
| 1.1.1.1 春化途径 | 第13-14页 |
| 1.1.1.2 光周期途径 | 第14-15页 |
| 1.1.1.3 自主途径 | 第15-16页 |
| 1.1.1.4 赤霉素途径 | 第16-17页 |
| 1.1.1.5 年龄途径 | 第17页 |
| 1.1.1.6 环境温度途径 | 第17-18页 |
| 1.2 植物IQD蛋白的功能分析 | 第18-21页 |
| 1.2.1 植物IQD蛋白的结构特点 | 第18-19页 |
| 1.2.2 植物IQD蛋白的系统发育分析 | 第19-20页 |
| 1.2.3 IQD蛋白的组织表达特性 | 第20页 |
| 1.2.4 植物IQD蛋白的生物学功能 | 第20-21页 |
| 1.2.4.1 IQD蛋白调控植物对环境和胁迫的响应 | 第20-21页 |
| 1.2.4.2 IQD蛋白参与植物生长和发育及其他方面的调控 | 第21页 |
| 1.3 Ac/Ds转座子 | 第21-24页 |
| 1.3.1 Ac/Ds转座特点 | 第22页 |
| 1.3.2 转座子标签在建立突变体库的应用 | 第22-23页 |
| 1.3.3 CRISPR/Cas9技术 | 第23-24页 |
| 1.4 温带禾本科模式植物二穗短柄草 | 第24页 |
| 1.5 本研究的目的和意义 | 第24-26页 |
| 2 材料与方法 | 第26-45页 |
| 2.1 实验材料 | 第26页 |
| 2.1.1 植物材料以及生长环境 | 第26页 |
| 2.1.2 菌株和质粒 | 第26页 |
| 2.1.3 酶和生化试剂 | 第26页 |
| 2.2 方法 | 第26-45页 |
| 2.2.1 植物总RNA的提取 | 第26-27页 |
| 2.2.2 反转录 | 第27-28页 |
| 2.2.3 荧光定量PCR | 第28页 |
| 2.2.4 半定量 | 第28-29页 |
| 2.2.5 构建转基因植物表达载体 | 第29-33页 |
| 2.2.5.1 基因的克隆 | 第29-30页 |
| 2.2.5.2 PCR产物胶回收 | 第30页 |
| 2.2.5.3 TA克隆 | 第30-31页 |
| 2.2.5.4 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第31页 |
| 2.2.5.5 大肠杆菌转化 | 第31-32页 |
| 2.2.5.6 菌落PCR | 第32页 |
| 2.2.5.7 试剂盒法提取质粒 | 第32-33页 |
| 2.2.5.8 DNA序列测定 | 第33页 |
| 2.2.5.9 酶切以及连接反应 | 第33页 |
| 2.2.6 根癌农杆菌EHA105感受态细胞的制备和质粒转化过程 | 第33-34页 |
| 2.2.6.1 制备根癌农杆菌EHA105感受态细胞 | 第33-34页 |
| 2.2.6.2 根癌农杆菌EHA105的质粒转化 | 第34页 |
| 2.2.7 二穗短柄草的遗传转化过程 | 第34-39页 |
| 2.2.7.1 诱导愈伤组织 | 第34-35页 |
| 2.2.7.2 二穗短柄草的侵染 | 第35-36页 |
| 2.2.7.3 二穗短柄草的共培养 | 第36-37页 |
| 2.2.7.4 二穗短柄草的筛选 | 第37-38页 |
| 2.2.7.5 二穗短柄草生芽 | 第38页 |
| 2.2.7.6 二穗短柄草生根 | 第38-39页 |
| 2.2.7.7 二穗短柄草移栽 | 第39页 |
| 2.2.8 PCR鉴定转基因苗 | 第39-42页 |
| 2.2.8.1 CTAB法提取基因组 | 第39-40页 |
| 2.2.8.2 PCR检测 | 第40页 |
| 2.2.8.3 分离边界 | 第40-42页 |
| 2.2.9 CRISPR/Cas9载体的构建及鉴定 | 第42-45页 |
| 2.2.9.1 载体构建 | 第42-44页 |
| 2.2.9.2 突变体的鉴定 | 第44-45页 |
| 3 结果与分析 | 第45-58页 |
| 3.1 二穗短柄草突变体的筛选 | 第45-47页 |
| 3.1.1 Ac/Ds转座子标签载体 | 第45页 |
| 3.1.2 突变体筛选 | 第45-47页 |
| 3.2 二穗短柄草晚花突变体bdlf2的初步研究 | 第47-58页 |
| 3.2.1 晚花突变体bdlf2表型分析 | 第47页 |
| 3.2.2 T-DNA定位和开花基因分析 | 第47-50页 |
| 3.2.3 二穗短柄草IQD家族的功能分析 | 第50-58页 |
| 3.2.3.1 二穗短柄草BdIQD1基因进化树分析 | 第50-52页 |
| 3.2.3.2 BdIQD1中IQ67结构域的氨基酸序列比对 | 第52页 |
| 3.2.3.3 二穗短柄草BdIQD1基因的不同表达模式分析 | 第52-53页 |
| 3.2.3.4 二穗短柄草中过表达BdIQD1基因影响穗发育 | 第53-56页 |
| 3.2.3.5 CRISPR/Cas9技术敲除二穗短柄草BdIQD1基因 | 第56-58页 |
| 4 讨论 | 第58-60页 |
| 5 结论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-69页 |
| 致谢 | 第69页 |
