| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 缩略语表 | 第12-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-21页 |
| 1 猪链球菌生物学性状及流行病学 | 第14页 |
| 2 猪链球菌毒力因子 | 第14-18页 |
| 2.1 多糖 | 第15页 |
| 2.2 蛋白类 | 第15-16页 |
| 2.2.1 溶菌酶释放蛋白和细胞外因子 | 第15-16页 |
| 2.2.2 溶血素 | 第16页 |
| 2.2.3 纤连蛋白结合蛋白 | 第16页 |
| 2.2.4 IgG结合蛋白 | 第16页 |
| 2.3 酶类 | 第16-18页 |
| 2.3.1 谷氨酸脱氢酶 | 第16-17页 |
| 2.3.2 ORF2毒力相关序列 | 第17页 |
| 2.3.3 转运基因G | 第17页 |
| 2.3.4 转录调节因子 | 第17页 |
| 2.3.5 分泌型核酸酶 | 第17页 |
| 2.3.6 次黄嘌呤核苷酸脱氢酶 | 第17-18页 |
| 2.4 毒力岛 | 第18页 |
| 3 致病菌抵抗吞噬细胞杀伤机制的研究 | 第18-20页 |
| 4 目的及意义 | 第20-21页 |
| 第二章 Δ1000SS基因缺失株、CΔ1000SS缺失互补株构建、验证及菌株生物学现象分析 | 第21-38页 |
| 1 材料与方法 | 第21-28页 |
| 1.1 材料 | 第21-24页 |
| 1.1.1 菌株、质粒与细胞系 | 第21-22页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第22页 |
| 1.1.3 主要仪器 | 第22-23页 |
| 1.1.4 引物 | 第23-24页 |
| 1.1.5 实验动物 | 第24页 |
| 1.2 方法 | 第24-28页 |
| 1.2.1 生长条件及培养基配制 | 第24页 |
| 1.2.2 电转化猪链球菌 | 第24-25页 |
| 1.2.3 敲除突变体的筛选和鉴定 | 第25页 |
| 1.2.4 互补株的构建 | 第25-26页 |
| 1.2.5 敲除株、互补株验证 | 第26页 |
| 1.2.6 生长曲线测定 | 第26-27页 |
| 1.2.7 小鼠竞争感染实验 | 第27页 |
| 1.2.8 全血杀菌实验 | 第27页 |
| 1.2.9 血中增殖实验 | 第27页 |
| 1.2.10 细胞粘附实验 | 第27-28页 |
| 1.2.11 PMN杀伤实验 | 第28页 |
| 2 结果与分析 | 第28-36页 |
| 2.1 敲除菌株Δ1000SS的筛选 | 第28-29页 |
| 2.2 互补质粒pAT18-1000的构建 | 第29-30页 |
| 2.3 互补质粒转化及验证互补成功 | 第30-31页 |
| 2.4 RT-PCR验证互补质粒转录 | 第31页 |
| 2.5 Real-Time PCR验证RNA转录量 | 第31-32页 |
| 2.6 生长曲线测定 | 第32页 |
| 2.7 CD1小鼠竞争感染实验 | 第32-33页 |
| 2.8 全血杀菌实验 | 第33-34页 |
| 2.9 血中增殖实验 | 第34页 |
| 2.10 细胞粘附实验 | 第34-35页 |
| 2.11 PMN杀伤实验 | 第35-36页 |
| 3 小结与讨论 | 第36-38页 |
| 3.1 小结 | 第36页 |
| 3.2 讨论 | 第36-38页 |
| 第三章 SSU05_1000在抵抗PMN吞噬机制中的功能研究 | 第38-57页 |
| 1 材料与方法 | 第38-43页 |
| 1.1 实验材料 | 第38-39页 |
| 1.1.1 菌株及质粒 | 第38-39页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第39页 |
| 1.1.3 主要仪器及器材 | 第39页 |
| 1.2 方法 | 第39-43页 |
| 1.2.1 His-1000蛋白纯化 | 第39-40页 |
| 1.2.2 核酸降解实验 | 第40页 |
| 1.2.3 血浆中与SSU05_1000互作蛋白的钓取及互作验证 | 第40-42页 |
| 1.2.4 补体沉积实验研究SSU05_1000在抗吞噬机制中的功能 | 第42-43页 |
| 2 实验结果与分析 | 第43-54页 |
| 2.1 His-1000蛋白纯化 | 第43-44页 |
| 2.2 核酸降解实验 | 第44-46页 |
| 2.3 血浆中与SSU05_1000互作蛋白的钓取及互作验证 | 第46-50页 |
| 2.3.1 His Pull-Down钓取与SSU05_1000结合蛋白 | 第46-48页 |
| 2.3.2 ELISA方法验证蛋白结合 | 第48页 |
| 2.3.3 Far WesternBlot验证SSU05_1000与Fg结合 | 第48-49页 |
| 2.3.4 流式细胞技术验证SSU05_1000与Fg结合 | 第49页 |
| 2.3.5 PMN杀伤实验验证蛋白互作 | 第49-50页 |
| 2.4 补体沉积实验研究SSU05_1000在抗吞噬机制中的功能 | 第50-54页 |
| 2.4.1 流式细胞实验条件优化 | 第50-52页 |
| 2.4.2 经典补体途径验证 | 第52-53页 |
| 2.4.3 旁路途径验证 | 第53-54页 |
| 3 小结与讨论 | 第54-57页 |
| 3.1 小结 | 第54-55页 |
| 3.1.1 核酸降解实验 | 第54页 |
| 3.1.2 血浆中与1000互作蛋白的钓取及互作验证 | 第54-55页 |
| 3.1.3 补体沉积实验研究SSU05_1000在抗吞噬机制中的功能 | 第55页 |
| 3.2 讨论 | 第55-57页 |
| 3.2.1 SS2抵抗NETs机制杀伤 | 第55-56页 |
| 3.2.2 Fg在SS2抵抗免疫细胞杀伤中可能的作用 | 第56-57页 |
| 第四章 结论与展望 | 第57-58页 |
| 1 结论 | 第57页 |
| 2 展望 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 附录 | 第63-72页 |
| 附录Ⅰ 试剂盒操作步骤 | 第63-65页 |
| 附录Ⅱ 主要试剂的配制 | 第65-69页 |
| 附录Ⅲ 常用实验方法 | 第69-72页 |
