| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 缩略语 | 第11-13页 |
| 1 文献综述 | 第13-26页 |
| 1.1 链霉菌及其模式菌株天蓝色链霉菌的概述 | 第13-16页 |
| 1.2 转座及Tn5转座 | 第16-18页 |
| 1.3 链霉菌中的转座诱变 | 第18-20页 |
| 1.3.1 链霉菌的体内转座 | 第19页 |
| 1.3.2 链霉菌中的体外转座 | 第19-20页 |
| 1.4 天蓝色链霉菌中形态分化相关基因 | 第20-22页 |
| 1.4.1 光秃基因bld | 第20-21页 |
| 1.4.2 白基因whi | 第21-22页 |
| 1.5 天蓝色链霉菌A3(2)中次级代谢调控基因 | 第22-25页 |
| 1.5.1 途径特异性调控基因 | 第22-23页 |
| 1.5.2 多效性调控基因 | 第23-25页 |
| 1.6 本课题研究的目的和意义 | 第25-26页 |
| 2 材料与方法 | 第26-41页 |
| 2.1 菌株 | 第26页 |
| 2.2 质粒与引物 | 第26-30页 |
| 2.3 培养基与生化试剂 | 第30-32页 |
| 2.4 DNA基本操作 | 第32-38页 |
| 2.4.1 大肠杆菌质粒的抽提 | 第32-33页 |
| 2.4.2 链霉菌总DNA的提取 | 第33页 |
| 2.4.3 DNA的连接 | 第33页 |
| 2.4.4 DNA片段凝胶回收(试剂盒回收) | 第33-34页 |
| 2.4.5 Southern blot(DIG杂交) | 第34-35页 |
| 2.4.6 大肠杆菌感受态制备及DNA转化 | 第35-36页 |
| 2.4.7 PCR技术 | 第36-37页 |
| 2.4.8 PCR-targeting中大肠杆菌电转化感受态的制备及电转化 | 第37-38页 |
| 2.5 链霉菌的基本遗传操作 | 第38-41页 |
| 2.5.1 大肠杆菌和链霉菌的接合转移 | 第38页 |
| 2.5.2 链霉菌原生质体制备 | 第38-39页 |
| 2.5.3 链霉菌原生质体融合 | 第39-41页 |
| 3 结果与分析 | 第41-86页 |
| 3.1 转座子载体构建及转座效率检测 | 第41-48页 |
| 3.1.1 IS493转座子载体pTn493A | 第41-42页 |
| 3.1.2 Tn5转座子载体pHL654、pHL655、pHL656 | 第42-43页 |
| 3.1.3 不稳定复制型IS493转座子pTn493B、pTn493C、pTn493D | 第43-44页 |
| 3.1.4 不稳定复制型Tn5转座子载体pHL661、pHL701 | 第44页 |
| 3.1.5 OE转座边界Tn5转座子载体pHL721、pHL722 | 第44-45页 |
| 3.1.6 Tn5p(5)转座酶Tn5转座子载体pHL724、pHL725 | 第45-46页 |
| 3.1.7 复制子在转座子内部的转座子载体pHL734 | 第46-48页 |
| 3.2 pHL724转座诱变构建天蓝色链霉菌A3(2)突变体库 | 第48-55页 |
| 3.2.1 突变体库构建及突变子表型筛选 | 第49页 |
| 3.2.2 突变子转座插入位点的测定 | 第49页 |
| 3.2.3 同一基因重复插入的突变体表型观察及基因功能分析 | 第49-55页 |
| 3.3 pHL734转座诱变构建天蓝色链霉菌A3(2)突变体库 | 第55-81页 |
| 3.3.1 突变体库构建及突变子表型筛选 | 第55页 |
| 3.3.2 1493株突变子的插入位点定位 | 第55-56页 |
| 3.3.3 Tn5转座插入靶位点分析 | 第56-59页 |
| 3.3.4 天蓝色链霉菌A3(2)自发突变率及转座突变子的稳定性 | 第59-60页 |
| 3.3.5 whi突变子的基因功能分析 | 第60-61页 |
| 3.3.6 blad突变子的基因功能分析 | 第61-63页 |
| 3.3.7 ACT产量升高突变子的基因功能分析 | 第63-65页 |
| 3.3.8 ACT产量降低突变子的基因功能分析 | 第65-69页 |
| 3.3.9 Red产量变化突变子的基因功能分析 | 第69-70页 |
| 3.3.10 重复插入同一基因的突变子表型比较 | 第70-73页 |
| 3.3.11 成簇突变基因功能分析 | 第73-81页 |
| 3.4 38株ACT高产突变子Genome shuffling | 第81-86页 |
| 3.4.1 突变子原生质体制备及融合 | 第81-82页 |
| 3.4.2 融合子的PCR检测 | 第82-84页 |
| 3.4.3 融合子后代的遗传标签检测 | 第84页 |
| 3.4.4 ACT高产菌株及PCR分析 | 第84-86页 |
| 4 总结与展望 | 第86-89页 |
| 4.1 总结 | 第86-87页 |
| 4.2 展望 | 第87-89页 |
| 参考文献 | 第89-97页 |
| 致谢 | 第97页 |
