| 摘要 | 第7-10页 |
| ABSTRACT | 第10-11页 |
| 缩略词表 | 第12-13页 |
| 前言 | 第13-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-40页 |
| 1 哺乳动物卵母细胞体外成熟的研究进展 | 第15-33页 |
| 1.1 哺乳动物卵母细胞体外成熟历史简要回顾 | 第15-16页 |
| 1.2 卵母细胞体外成熟的意义 | 第16-17页 |
| 1.3 卵母细胞的成熟 | 第17-21页 |
| 1.3.1 卵母细胞的核成熟 | 第18-19页 |
| 1.3.2 卵母细胞的胞质成熟 | 第19-21页 |
| 1.4 卵母细胞成熟过程中的表观修饰 | 第21-28页 |
| 1.4.1 卵母细胞成熟发育过程中的DNA甲基化变化 | 第21-23页 |
| 1.4.2 卵母细胞成熟发育过程中的组蛋白乙酰化变化 | 第23-25页 |
| 1.4.3 卵母细胞成熟发育过程中印迹的重建 | 第25-28页 |
| 1.5 影响哺乳动物卵母细胞体外成熟的几个因素 | 第28-33页 |
| 1.5.1 成熟时间 | 第29-30页 |
| 1.5.2 抗生素和油层覆盖 | 第30页 |
| 1.5.3 温度和湿度 | 第30-31页 |
| 1.5.4 气相 | 第31页 |
| 1.5.5 卵母细胞自身质量 | 第31-33页 |
| 2 卵母细胞胞质对后续胚胎发育的影响 | 第33-37页 |
| 2.1 早期胚胎发育过程中胞质内mRNA变化情况 | 第33-35页 |
| 2.2 胞质含量对胚胎发育影响 | 第35-36页 |
| 2.3 胞质质量对胚胎发育的影响 | 第36-37页 |
| 3 精子DNA甲基化水平对胚胎发育的影响 | 第37-39页 |
| 3.1 早期胚胎中精子DNA甲基化模式的维持 | 第37-38页 |
| 3.2 表观修饰药物对精子DNA甲基化及胚胎发育的应用 | 第38-39页 |
| 4 小结 | 第39-40页 |
| 第二章 TSA和5-aza-dc单独或联合处理卵母细胞对精子克隆胚发育的影响 | 第40-56页 |
| 1 实验材料 | 第41-45页 |
| 1.1 主要仪器设备 | 第41页 |
| 1.2 实验用主要耗材 | 第41-42页 |
| 1.3 主要试剂和药品 | 第42页 |
| 1.4 实验操作液 | 第42-44页 |
| 1.4.1 捡卵液 | 第42-43页 |
| 1.4.2 体外成熟液 | 第43页 |
| 1.4.3 卵母细胞操作液 | 第43-44页 |
| 1.4.4 精子洗涤液 | 第44页 |
| 1.4.5 胚胎培养液SOF | 第44页 |
| 1.4.6 激活剂 | 第44页 |
| 1.5 显微操作针的制备 | 第44-45页 |
| 1.5.1 去核/注精针的制备 | 第44-45页 |
| 1.5.2 固定针的制备 | 第45页 |
| 2 实验方法 | 第45-48页 |
| 2.1 试验设计 | 第45-46页 |
| 2.2 采取卵巢 | 第46页 |
| 2.3 收集卵母细胞 | 第46页 |
| 2.4 卵母细胞体外成熟 | 第46页 |
| 2.5 显微操作卵母细胞的准备 | 第46页 |
| 2.6 注射用精子的准备 | 第46-47页 |
| 2.7 卵母细胞的显微去核 | 第47页 |
| 2.8 精子克隆胚的构建 | 第47页 |
| 2.9 精子克隆胚的激活 | 第47页 |
| 2.10 胚胎共培养 | 第47页 |
| 2.11 成熟后卵母细胞DNA甲基化免疫荧光染色检测 | 第47-48页 |
| 3 数据统计 | 第48页 |
| 4 结果与分析 | 第48-52页 |
| 4.1 TSA和5-aza-dc单独或联合处理卵母细胞对其成熟率的影响 | 第48-49页 |
| 4.2 TSA和5-aza-dc单独或联合处理卵母细胞对精子克隆胚发育的影响 | 第49-51页 |
| 4.3 处理后成熟卵母细胞的DNA甲基化 | 第51-52页 |
| 5 讨论 | 第52-56页 |
| 5.1 TSA和5-aza-dc对卵母细胞成熟率的影响 | 第52-54页 |
| 5.2 TSA和5-aza-dc处理卵母细胞对精子克隆胚发育的影响 | 第54-55页 |
| 5.3 小结 | 第55-56页 |
| 第三章 用5-aza-dc处理精子细胞对精子克隆胚发育的影响 | 第56-66页 |
| 1 实验材料 | 第57页 |
| 1.1 主要仪器设备和耗材 | 第57页 |
| 1.2 主要试剂和药品 | 第57页 |
| 1.3 实验操作液 | 第57页 |
| 2 实验方法 | 第57-59页 |
| 2.1 试验设计 | 第57页 |
| 2.2 卵巢及卵母细胞收集 | 第57页 |
| 2.3 卵母细胞体外成熟 | 第57-58页 |
| 2.4 注射用精子的准备 | 第58页 |
| 2.5 卵母细胞的准备,胚胎构建及后续胚胎培养 | 第58页 |
| 2.6 精子DNA甲基化免疫荧光染色检测 | 第58页 |
| 2.7 精子克隆胚DNA甲基化免疫荧光染色检测 | 第58-59页 |
| 3 数据统计 | 第59页 |
| 4 结果与分析 | 第59-63页 |
| 4.1 处理后精子DNA甲基化水平变化及其与5-aza-dc浓度的关系 | 第59-61页 |
| 4.2 处理精子对精子克隆胚发育的影响及其与5-aza-dc浓度的关系 | 第61页 |
| 4.3 处理对精子克隆胚DNA甲基化水平的影响及其与5-aza-dc浓度的关系 | 第61-63页 |
| 5 讨论 | 第63-66页 |
| 5.1 5-aza-dc对于冻精中精细胞DNA甲基化水平的影响 | 第63-64页 |
| 5.2 5-aza-dc处理冻精中精细胞对其衍生的精子克隆胚发育的影响 | 第64-65页 |
| 5.3 小结 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-83页 |
| 附表 | 第83-85页 |
| 附图 | 第85-87页 |
| 致谢 | 第87-89页 |
