| 摘要 | 第4-6页 |
| 英文摘要 | 第6-7页 |
| 1 前言 | 第11-26页 |
| 1.1 香蕉生产现状 | 第11-12页 |
| 1.1.1 香蕉生产的重要性 | 第11页 |
| 1.1.2 香蕉植株抗逆品种选育的需要 | 第11页 |
| 1.1.3 香蕉果实采后货架期和品质的重要性 | 第11-12页 |
| 1.2 影响香蕉生长的气候因素 | 第12-13页 |
| 1.2.1 冷害 | 第12页 |
| 1.2.2 涝害 | 第12页 |
| 1.2.3 伤害 | 第12-13页 |
| 1.3 乙烯代谢途径研究进展 | 第13-16页 |
| 1.3.1 植物生理与乙烯 | 第13页 |
| 1.3.2 乙烯的合成途径 | 第13-14页 |
| 1.3.3 乙烯的信号转导途径 | 第14-16页 |
| 1.4 植物谷氨酸脱羧酶(Glutamate decarboxylase,GAD)研究进展 | 第16-23页 |
| 1.4.1 植物GAD、γ-氨基丁酸(gamma-aminobutyrate,GABA)简介 | 第16-17页 |
| 1.4.2 植物谷氨酸脱羧酶的生成和活性调控 | 第17-19页 |
| 1.4.3 GABA功能和作用机理 | 第19-22页 |
| 1.4.4 乙烯与GAD、GABA的相互调控关系 | 第22-23页 |
| 1.5 拟南芥乙烯代谢研究进展 | 第23-24页 |
| 1.5.1 拟南芥模式植物的优势 | 第23-24页 |
| 1.6 本研究的目的意义 | 第24-25页 |
| 1.7 技术路线 | 第25-26页 |
| 2 材料、试剂与仪器 | 第26-27页 |
| 2.1 材料 | 第26页 |
| 2.2 试剂 | 第26页 |
| 2.3 仪器 | 第26-27页 |
| 3 方法 | 第27-36页 |
| 3.1 在非生物胁迫下香蕉幼苗中MaGAD1的表达 | 第27-30页 |
| 3.1.1 乙烯利处理香蕉幼苗 | 第27-28页 |
| 3.1.2 香蕉幼苗涝害胁迫 | 第28页 |
| 3.1.3 香蕉幼苗伤害胁迫 | 第28-29页 |
| 3.1.4 香蕉幼苗冷害胁迫 | 第29页 |
| 3.1.5 各胁迫处理后香蕉幼苗RNA提取 | 第29页 |
| 3.1.6 cDNA第一链合成 | 第29页 |
| 3.1.7 荧光定量RT-PCR分析MaGAD1在mRNA水平上的表达 | 第29-30页 |
| 3.1.8 荧光定量PCR的定量方法 | 第30页 |
| 3.2 香蕉叶片内GAD酶活性分析 | 第30-32页 |
| 3.2.1 工作曲线建立 | 第30-31页 |
| 3.2.2 MaGAD酶粗酶液的提取与酶反应 | 第31页 |
| 3.2.3 内源GABA提取 | 第31页 |
| 3.2.4 GABA定量测定 | 第31-32页 |
| 3.3 转MaGAD1基因拟南芥 | 第32-33页 |
| 3.3.1 拟南芥的培养 | 第32页 |
| 3.3.2 农杆菌介导的浸染花序法遗传转化拟南芥(Clough S J,Bent A F 1998) | 第32-33页 |
| 3.3.3 T1带抗性筛选 | 第33页 |
| 3.3.4 转基因拟南芥T2代培养 | 第33页 |
| 3.4 MaGAD1转基因拟南芥的分子检测 | 第33-34页 |
| 3.4.1 野生型和MaGADl转基因拟南芥叶片总DNA提取 | 第33页 |
| 3.4.2 MaGAD1转基因拟南芥的PCR检测 | 第33-34页 |
| 3.4.3 MaGAD1转基因拟南芥的Southern blot检测 | 第34页 |
| 3.5 MaGAD1转基因植株种子萌发率及外源ACC处理对萌发率的影响及形态观察 | 第34-35页 |
| 3.6 MaGAD1转基因植株中乙烯相关基因的表达分析 | 第35-36页 |
| 3.6.1 外源乙烯利处理野生型和MaGAD1转基因植株 | 第35页 |
| 3.6.2 野生型和MaGADl转基因拟南芥叶片总RNA提取 | 第35页 |
| 3.6.3 cDNA第一链的合成 | 第35页 |
| 3.6.4 荧光定量PCR分析外源乙烯利处理下各株系中MaGAD1以及乙烯相关基因在mRNA水平上的表达 | 第35-36页 |
| 4 结果 | 第36-50页 |
| 4.1 非生物胁迫下MaGAD1在香蕉幼苗中的表达 | 第36-39页 |
| 4.1.1 外源乙烯利处理下MaGAD1基因在香蕉幼苗叶片中的表达 | 第36-37页 |
| 4.1.2 涝害胁迫下MaGAD1在香蕉幼苗叶片中的表达 | 第37-38页 |
| 4.1.3 伤害胁迫下MaGAD1在香蕉幼苗叶片中的表达 | 第38页 |
| 4.1.4 冷害胁迫下MaGAD1在香蕉幼苗叶片中的表达 | 第38-39页 |
| 4.2 工作曲线的建立 | 第39页 |
| 4.3 GAD酶在各胁迫下的活性变化 | 第39-41页 |
| 4.3.1 外源乙烯利处理下香蕉幼苗叶片中GAD酶的活性 | 第39-40页 |
| 4.3.2 涝害胁迫处理下香蕉幼苗叶片中GAD酶的活性 | 第40-41页 |
| 4.3.3 伤害胁迫处理下香蕉幼苗叶片中GAD酶的活性 | 第41页 |
| 4.4 各胁迫处理下香蕉叶片中内源GABA含量 | 第41-43页 |
| 4.4.1 外源乙烯利处理下香蕉幼苗叶片中内源GABA的含量 | 第41-42页 |
| 4.4.2 涝害胁迫处理下香蕉幼苗叶片中内源GABA的含量 | 第42-43页 |
| 4.4.3 伤害胁迫处理下香蕉幼苗叶片中内源GABA的含量 | 第43页 |
| 4.5 MaGAD1在拟南芥中过量表达 | 第43-50页 |
| 4.5.1 T1、T2代抗性筛选 | 第43-44页 |
| 4.5.2 MaG4D1转基因株系的PCR检测 | 第44-45页 |
| 4.5.3 MaGAD1转基因株系的Southern检测 | 第45-46页 |
| 4.5.4 MaGAD1转基因植株种子萌发率 | 第46页 |
| 4.5.5 外源ACC处理对MaGAD1转基因植株幼苗表型的影响 | 第46-47页 |
| 4.5.6 乙烯利处理下各株系中乙烯信号途径和生物合成相关基因在mRNA水平上的表达 | 第47-50页 |
| 5 分析 | 第50-56页 |
| 5.1 在香蕉幼苗中MaGAD1对各胁迫的应答分析 | 第50-52页 |
| 5.1.1 在各胁迫下MaGAD1表达量 | 第50-51页 |
| 5.1.2 各胁迫下GAD酶活性、内源GABA含量 | 第51-52页 |
| 5.2 野生型和转基因拟南芥种子萌发率 | 第52-53页 |
| 5.3 外源ACC处理野生型和转基因拟南芥的表型差异 | 第53-54页 |
| 5.4 MaGAD1转基因拟南芥中乙烯相关基因的表达分析 | 第54-56页 |
| 6 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-63页 |
| 致谢 | 第63页 |
