| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-9页 |
| 目录 | 第9-11页 |
| 1 前言 | 第11-13页 |
| 2 材料、试剂和仪器 | 第13-19页 |
| ·细胞株 | 第13页 |
| ·主要试剂 | 第13-14页 |
| ·主要试剂配制 | 第14-16页 |
| ·仪器 | 第16-19页 |
| 3 实验方法与步骤 | 第19-29页 |
| ·GFP-LC3 表达载体的构建与鉴定 | 第19-24页 |
| ·PC12 细胞总 RNA 的提取 | 第19页 |
| ·反转录合成 cDNA | 第19-20页 |
| ·PCR 扩增 | 第20页 |
| ·DNA 的琼脂糖凝胶电泳 | 第20-21页 |
| ·PCR 产物和酶切产物的回收和纯化 | 第21页 |
| ·GFP-LC3 表达载体的构建 | 第21-22页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第22页 |
| ·重组质粒转化感受态细胞 | 第22-23页 |
| ·质粒 DNA 的提取 | 第23页 |
| ·表达载体 GFP-LC3 的鉴定 | 第23-24页 |
| ·GFP-LC3 瞬时转染鉴定酒精致 PC12 细胞损伤中自噬的发生 | 第24页 |
| ·MTT 法检测 PC12 细胞生存率 | 第24页 |
| ·MTT 法制作 PC12 细胞浓度标准曲线 | 第24页 |
| ·MTT 法检测不同处理组对 PC12 细胞生存率的影响 | 第24页 |
| ·高内涵活细胞成像系统检测 PC12 细胞活性氧水平 | 第24-25页 |
| ·免疫荧光检测酒精致 PC12 细胞损伤中自噬水平的变化 | 第25页 |
| ·高内涵活细胞成像系统检测酒精致 PC12 细胞损伤中自噬水平的变化 | 第25-26页 |
| ·Western blot 检测自噬与凋亡相关蛋白 | 第26-29页 |
| ·PC12 细胞总蛋白的提取 | 第26页 |
| ·制作蛋白标准曲线及样品蛋白的定量 | 第26页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶（SDS-PAGE）电泳 | 第26-27页 |
| ·转膜和封闭 | 第27-28页 |
| ·免疫反应 | 第28-29页 |
| 4 结果 | 第29-41页 |
| ·GFP-LC3 瞬时转染鉴定酒精致 PC12 细胞损伤过程中自噬的发生 | 第29-32页 |
| ·LC3 基因的获取 | 第29页 |
| ·真核表达载体 pEGFP-LC3 的构建和鉴定 | 第29-31页 |
| ·GFP-LC3 瞬时转染观测酒精处理 PC12 细胞后自噬的发生 | 第31-32页 |
| ·MTT 法检测 PC12 细胞生存率 | 第32-33页 |
| ·高内涵活细胞成像系统检测 PC12 细胞活性氧水平 | 第33-34页 |
| ·免疫荧光检测酒精致 PC12 细胞损伤中自噬水平的变化 | 第34-36页 |
| ·高内涵活细胞成像系统检测酒精致 PC12 细胞损伤中自噬水平的变化 | 第36-37页 |
| ·Western blot 检测自噬与凋亡相关蛋白 | 第37-41页 |
| 5 结论 | 第41-43页 |
| 6 讨论 | 第43-47页 |
| 参考文献 | 第47-51页 |
| 文献综述 | 第51-60页 |
| 参考文献 | 第57-60页 |
| 附录 | 第60-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
