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神经鞘磷脂合成酶基因沉默对SMMC-7721细胞凋亡的影响(血清SM、CETP和PLTP对2型糖尿病形成的作用)

摘要第1-6页
ABSTRACT第6-8页
目录第8-10页
1 引言第10-12页
2 材料、仪器与方法第12-24页
   ·仪器设备第12-13页
   ·主要试剂第13-14页
   ·常用试剂配制方法第14-18页
   ·实验方法及操作步骤第18-20页
     ·MTT 检测 TNF-α对 SMMC-7721 细胞增殖的变化第18-19页
     ·SMS 酶活性测定第19-20页
   ·Hoechst33258/PI 双染法观察活细胞状态第20页
     ·细胞培养、RNA 干扰操作同上第20页
     ·转染后 Hoechst/pI 双染第20页
   ·Annexin V-FITC、PI 双染法检测细胞凋亡第20页
     ·细胞培养、RNA 干扰操作同上第20页
     ·流式细胞术第20页
   ·Western blot 检测蛋白表达的变化第20-22页
     ·细胞培养、RNA 干扰操作同上第20页
     ·细胞蛋白的提取第20页
     ·考马斯亮蓝 G250 测定细胞总蛋白第20-21页
     ·蛋白质凝胶电泳第21-22页
     ·蛋白质转印第22页
     ·Western blot 检测 Caspase-8,Caspase-3 及β-actin 蛋白量第22页
   ·血清测定第22-23页
     ·患者血清来源第22-23页
     ·血清 SM、PLTP 和 CETP 测定第23页
       ·血糖检测第23页
       ·SM 测定第23页
       ·PLTP 测定第23页
       ·CETP 测定第23页
       ·PLTP 和 CETP 测定的标准品第23页
   ·统计学处理第23-24页
3 实验结果第24-30页
   ·TNF-α对 SMMC-7721 细胞的抑制作用第24页
   ·SMS 酶活性测定第24页
   ·Hoechst 33258/PI 联合染色 SMMC-7721 活细胞观察第24-25页
   ·FITC-annexin V/PI 双染法流式细胞仪检测结果第25页
   ·Western-blot 检测蛋白表达量变化第25页
   ·患者血清 SM、PLTP 及 CETP 等测定结果第25-30页
4 讨论第30-34页
5 参考文献第34-38页
6 结论第38-40页
7 附图及图版说明第40-44页
文献综述第44-56页
 1. 前言第44-45页
 2. AS 的临床分期第45-46页
   ·无症状隐匿期第45页
   ·缺血期第45页
   ·坏死期第45-46页
   ·纤维化期第46页
 3. ⅡTDM 发病病因的理论分析第46-47页
   ·与 I 型ⅡTDM 有关的因素第46页
   ·与ⅡTDM 有关的因素第46-47页
   ·与妊娠型ⅡTDM 相关的因素第47页
 4. SM、SMS 的概述第47-48页
 5. AS 与ⅡTDM 的关系第48页
 6. PLTP 在 AS 形成及ⅡTDM 中的作用第48-49页
 7. CETP 与 AS 的形成的关系第49-50页
 8. 总结和展望第50-52页
 参考文献第52-56页
附录A 缩略语词汇表第56-57页
附录B 攻读学位期间发表的论文第57-58页
致谢第58-59页

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