| 摘要 | 第9-12页 |
| ABSTRACT | 第12-15页 |
| 中英文缩写对照表 | 第16-17页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-41页 |
| 1 引言 | 第17页 |
| 2 间充质干细胞概述 | 第17-18页 |
| 3 miRNAs的生物合成过程以及功能 | 第18-20页 |
| 4 miRNAs调控间充质干细胞增殖、分化、凋亡 | 第20-39页 |
| 4.1 miRNAs调控间充质干细胞成骨分化 | 第20-24页 |
| 4.1.1 miRNAs抑制间充质干细胞成骨分化 | 第20-22页 |
| 4.1.2 miRNAs促进间充质干细胞成骨分化 | 第22-24页 |
| 4.2 miRNAs调控间充质干细胞成脂分化 | 第24-29页 |
| 4.2.1 促进成脂分化的miRNAs | 第25-27页 |
| 4.2.2 抑制成脂分化的miRNAs | 第27-29页 |
| 4.3 miRNAs同时调控间充质干细胞成脂和成骨分化 | 第29-33页 |
| 4.4 miRNAs同时调控间充质干细胞增殖和成骨分化 | 第33-35页 |
| 4.5 miRNAs同时调控间充质干细胞增殖和成脂分化 | 第35-37页 |
| 4.6 miRNAs同时调控间充质干细胞增殖、分化以及凋亡 | 第37-39页 |
| 5 miR-144-3p功能概述以及研究的目的与意义 | 第39-41页 |
| 第二章 材料与方法 | 第41-67页 |
| 1 试验材料 | 第41-44页 |
| 1.1 载体和菌株 | 第41页 |
| 1.2 主要试剂和仪器 | 第41-42页 |
| 1.3 主要溶液的配制 | 第42-44页 |
| 2 试验方法 | 第44-67页 |
| 2.1 细胞培养及诱导分化 | 第44-45页 |
| 2.1.1 细胞的复苏 | 第44页 |
| 2.1.2 细胞的常规培养 | 第44页 |
| 2.1.3 细胞冻存 | 第44页 |
| 2.1.4 C3H10T1/2细胞诱导成骨分化 | 第44-45页 |
| 2.1.5 C3H10T1/2细胞成脂诱导分化 | 第45页 |
| 2.2 细胞转染及双荧光素酶活性的测定 | 第45-46页 |
| 2.2.1 细胞的转染 | 第45-46页 |
| 2.2.2 荧光素酶相对活性的检测 | 第46页 |
| 2.3 细胞总RNA的提取 | 第46-47页 |
| 2.4 qRT-PCR分析 | 第47-51页 |
| 2.4.1 miRNA的定量分析 | 第47-49页 |
| 2.4.2 基因的定量分析 | 第49-51页 |
| 2.5 油红O染色 | 第51页 |
| 2.6 碱性磷酸酶染色以及活性测定 | 第51-53页 |
| 2.6.1 细胞碱性磷酸酶染色 | 第51页 |
| 2.6.2 碱性磷酸酶活性测定 | 第51-53页 |
| 2.7 茜素红染色及定量分析 | 第53页 |
| 2.7.1 茜素红染色 | 第53页 |
| 2.7.2 茜素红定量分析 | 第53页 |
| 2.8 细胞增殖测定相关研究方法 | 第53-55页 |
| 2.8.1 流式细胞仪分析细胞周期 | 第53-54页 |
| 2.8.2 xCELLigence细胞实时定量监控系统 | 第54-55页 |
| 2.9 流式细胞仪分析细胞凋亡情况 | 第55-56页 |
| 2.10 靶基因预测以及靶基因3'UTR双荧光素酶报告载体及其突变载体的构建 | 第56-63页 |
| 2.10.1 靶基因预测 | 第56页 |
| 2.10.2 预测靶基因3'UTR双荧光素酶报告载体及其突变载体的构建 | 第56-63页 |
| 2.11 靶基因的鉴定 | 第63-64页 |
| 2.12 质粒载体(pcDNA-3.1-Smad4超表达载体)构建 | 第64页 |
| 2.13 Western blotting分析 | 第64-66页 |
| 2.13.1 蛋白提取 | 第64-65页 |
| 2.13.2 SDS-PAGE电泳 | 第65页 |
| 2.13.3 转膜 | 第65页 |
| 2.13.4 抗原抗体免疫反应 | 第65-66页 |
| 2.13.5 抗体 | 第66页 |
| 2.14 主要数据库及分析软件 | 第66页 |
| 2.15 统计学分析 | 第66-67页 |
| 第三章 结果与分析 | 第67-97页 |
| 1 miR-144-3p对间充质干细胞成骨分化的作用研究 | 第67-80页 |
| 1.1 miR-144-3p在成骨诱导过程中的表达规律 | 第67-68页 |
| 1.2 研究miR-144-3p在成骨分化过程中的作用 | 第68-72页 |
| 1.3 miR-144-3p靶基因的鉴定 | 第72-74页 |
| 1.4 细胞水平研究Smad4对于间充质干细胞成骨分化的影响 | 第74-80页 |
| 2 miR-144-3p对间充质干细胞成脂分化的作用研究 | 第80-87页 |
| 2.1 miR-144-3p在成脂诱导过程中的表达规律 | 第80-81页 |
| 2.2 研究miR-144-3p在成脂分化过程中的作用 | 第81-84页 |
| 2.3 miR-144-3p靶基因的鉴定 | 第84-87页 |
| 3 miR-144-3p对于间充质干细胞增殖与凋亡的作用研究 | 第87-97页 |
| 3.1 miR-144-3p在间充质干细胞细胞增殖过程中的作用 | 第87-90页 |
| 3.2 研究Smad4基因在C3H10T1/2细胞增殖过程中的作用 | 第90-94页 |
| 3.3 研究miR-144-3p在细胞凋亡过程中的作用 | 第94-97页 |
| 第四章 讨论 | 第97-110页 |
| 1 miR-144-3p保守性分析 | 第97-98页 |
| 2 miR-144-3p功能分析 | 第98-107页 |
| 2.1 miR-144-3p对间充质干细胞成骨分化的作用 | 第99-102页 |
| 2.2 miR-144-3p对间充质干细胞成脂分化的作用 | 第102-104页 |
| 2.3 miR-144-3p对于间充质干细胞增殖与凋亡的作用 | 第104-107页 |
| 3 靶基因预测以及鉴定 | 第107-108页 |
| 4 本研究的主要创新点 | 第108-109页 |
| 5 本研究的不足之处 | 第109页 |
| 6 下一步研究计划 | 第109-110页 |
| 参考文献 | 第110-130页 |
| 附录 | 第130-132页 |
| 在读期间发表论文题录 | 第132-133页 |
| 致谢 | 第133页 |
