| 第一部分: AJUBA通过上调MMP10和MMP13表达促进食管鳞癌细胞侵袭转移机制的研究 | 第10-98页 |
| 中英文缩略词表 | 第11-12页 |
| 摘要 | 第12-14页 |
| Abstract | 第14-16页 |
| 前言 | 第16-21页 |
| 一、食管癌研究进展 | 第16-17页 |
| 二、ERK信号通路对食管癌的影响 | 第17-18页 |
| 三、转录组测序技术及其在肿瘤研究中的运用 | 第18-19页 |
| 四、AJUBA基因在肿瘤中的研究进展 | 第19-21页 |
| 实验材料 | 第21-25页 |
| 一、实验试剂 | 第21-23页 |
| 二、主要仪器设备 | 第23-24页 |
| 三、溶液配制 | 第24-25页 |
| 实验方法 | 第25-58页 |
| 一、食管鳞癌组织样本的收集 | 第25页 |
| 二、食管鳞癌细胞系 | 第25-26页 |
| 2.1 细胞的复苏 | 第25页 |
| 2.2 细胞的培养和传代 | 第25-26页 |
| 2.3 细胞的冻存 | 第26页 |
| 三、食管鳞癌细胞系中DNA和总RNA的提取 | 第26-28页 |
| 3.1 食管鳞癌细胞系DNA的提取及细胞系鉴定 | 第26-27页 |
| 3.2 食管鳞癌细胞系总RNA的提取 | 第27-28页 |
| 四、RT-PCR半定量检测mRNA表达水平 | 第28-31页 |
| 4.1 反转录生成cDNA | 第28-29页 |
| 4.2 荧光定量RT-PCR反应 | 第29-31页 |
| 五、Western Blot检测蛋白表达水平 | 第31-35页 |
| 5.1 总蛋白的提取 | 第31-32页 |
| 5.2 蛋白浓度的测定 | 第32-33页 |
| 5.3 Western Blot蛋白印迹 | 第33-35页 |
| 六、免疫组织化学染色 | 第35-36页 |
| 七、质粒构建 | 第36-41页 |
| 7.1 构建AJUBA敲降质粒 | 第36-37页 |
| 7.2 构建AJUBA过表达质粒 | 第37-38页 |
| 7.3 质粒的扩增与提取 | 第38-41页 |
| 八、细胞功能学实验 | 第41-49页 |
| 8.1 慢病毒的包装 | 第41-43页 |
| 8.2 慢病毒感染目的细胞系 | 第43-44页 |
| 8.3 细胞增殖实验 | 第44-45页 |
| 8.4 平板克隆形成试验 | 第45页 |
| 8.5 细胞周期检测 | 第45-46页 |
| 8.6 细胞凋亡检测 | 第46-47页 |
| 8.7 细胞迁移实验 | 第47-48页 |
| 8.8 细胞侵袭实验 | 第48-49页 |
| 8.9 细胞划痕实验 | 第49页 |
| 九、动物实验 | 第49-53页 |
| 9.1 裸鼠皮下成瘤实验 | 第49-50页 |
| 9.2 小鼠尾静脉注射肺定植实验 | 第50-52页 |
| 9.3 转移肺的石蜡包埋组织蜡块的制备 | 第52页 |
| 9.4 组织切片 | 第52-53页 |
| 十、RNA测序 | 第53-57页 |
| 10.1 病毒包装和感染 | 第53-54页 |
| 10.2 RNA质量分析 | 第54-56页 |
| 10.3 RNA-sequencing文库制备与上机测序 | 第56页 |
| 10.4 原始数据的后续处理 | 第56-57页 |
| 10.5 差异表达基因的功能分析 | 第57页 |
| 十一、统计方法 | 第57-58页 |
| 实验结果 | 第58-87页 |
| 一、AJUBA在食管鳞癌组织中广泛过表达 | 第58-62页 |
| 1.1 AJUBA在食管鳞癌组织中的mRNA和蛋白表达水平. | 第58-61页 |
| 1.2 AJUBA在食管鳞癌细胞系中的mRNA和蛋白表达水平.. | 第61-62页 |
| 二、食管鳞癌细胞系中AJUBA基因功能的研究. | 第62-75页 |
| 2.1 建立AJUBA敲降的稳转细胞系. | 第62-63页 |
| 2.2 建立AJUBA过表达的稳转细胞系 | 第63-64页 |
| 2.3 稳定敲降AJUBA抑制食管鳞癌细胞的体外增殖 | 第64-65页 |
| 2.4 敲降AJUBA抑制食管鳞癌细胞体内成瘤 | 第65-67页 |
| 2.5 AJUBA敲降导致食管鳞癌细胞G2/M阻滞 | 第67-68页 |
| 2.6 AJUBA增强食管鳞癌细胞对顺铂诱导凋亡的抵抗 | 第68-69页 |
| 2.7 AJUBA对食管鳞癌细胞迁移和侵袭的影响 | 第69-73页 |
| 2.8 AJUBA过表达促进食管鳞癌细胞体内转移 | 第73-75页 |
| 三、AJUBA促进侵袭转移的机制研究 | 第75-87页 |
| 3.1 RNA质量检测和AJUBA敲降效率检测 | 第75-76页 |
| 3.2 RNA-sequencing比对情况 | 第76页 |
| 3.3 AJUBA敲降前后的差异表达基因 | 第76-81页 |
| 3.4 差异表达基因的GO功能富集分析 | 第81-82页 |
| 3.5 验证MMP10和MMP13表达水平的改变 | 第82-84页 |
| 3.6 AJUBA和MMP10,MMP13表达水平呈显著正相关 | 第84-85页 |
| 3.7 AJUBA通过激活ERK上调MMP10和MMP13的表达水平 | 第85-87页 |
| 讨论 | 第87-92页 |
| 小结 | 第92-93页 |
| 参考文献 | 第93-98页 |
| 第二部分: 5-hmC表达下调是食管鳞癌独立的术后不良预后因素 | 第98-138页 |
| 中英文缩略词表 | 第99-100页 |
| 摘要 | 第100-102页 |
| Abstract | 第102-104页 |
| 前言 | 第104-108页 |
| 实验材料 | 第108-111页 |
| 一、实验试剂 | 第108-109页 |
| 二、主要仪器设备 | 第109-110页 |
| 三、溶液配制 | 第110-111页 |
| 实验方法 | 第111-121页 |
| 一、食管鳞癌组织样本的收集 | 第111页 |
| 二、食管鳞癌细胞系 | 第111-113页 |
| 2.1 细胞的复苏 | 第111-112页 |
| 2.2 细胞的培养和传代 | 第112页 |
| 2.3 细胞的冻存 | 第112-113页 |
| 三、食管鳞癌组织及细胞系中DNA和总RNA的提取 | 第113-116页 |
| 3.1 食管鳞癌组织基因组DNA的提取 | 第113页 |
| 3.2 食管鳞癌细胞系总DNA的提取 | 第113-114页 |
| 3.3 食管鳞癌组织中总RNA的提取 | 第114-115页 |
| 3.4 食管鳞癌细胞系总RNA的提取 | 第115-116页 |
| 四、RT-PCR半定量检测mRNA表达水平 | 第116-118页 |
| 4.1 反转录生成cDNA | 第116-117页 |
| 4.2 荧光定量RT-PCR反应 | 第117-118页 |
| 五、免疫组织化学染色 | 第118-120页 |
| 六、DNA斑点杂交 | 第120页 |
| 七、统计方法 | 第120-121页 |
| 实验结果 | 第121-131页 |
| 一、5-hmC水平在食管鳞癌组织和细胞系中广泛降低 | 第121-124页 |
| 二、5-hmC水平下调是食管鳞癌的不良预后因素 | 第124-127页 |
| 三、TET在食管鳞癌中的表达水平 | 第127-129页 |
| 四、5-hmC与TET,IDH突变的关系 | 第129-131页 |
| 讨论 | 第131-134页 |
| 小结 | 第134-135页 |
| 参考文献 | 第135-138页 |
| 资金资助 | 第138-139页 |
| 在学期间发表论文 | 第139-140页 |
| 文献综述 | 第140-149页 |
| 参考文献 | 第145-149页 |
| 致谢 | 第149-150页 |
| 个人简历 | 第150-151页 |
