摘要 | 第3-5页 |
ABSTRACT | 第5-6页 |
缩略词表 | 第12-13页 |
第一章 文献综述 | 第13-31页 |
1 小熊猫概况 | 第13-18页 |
1.1 小熊猫的发现 | 第13-14页 |
1.2 小熊猫的分类 | 第14页 |
1.3 小熊猫的繁殖特性 | 第14-15页 |
1.4 小熊猫资源现状与保护 | 第15-16页 |
1.5 小熊猫圈养历史及现状 | 第16-18页 |
1.5.1 全球小熊猫圈养历史及现状 | 第16-17页 |
1.5.2 中国小熊猫圈养历史及现状 | 第17-18页 |
2 小熊猫分子遗传学研究现状 | 第18-21页 |
2.1 DNA指纹图谱 | 第18-19页 |
2.2 限制性片段长度多态性 | 第19页 |
2.3 随机扩增多态性DNA | 第19页 |
2.4 线粒体DNA | 第19-20页 |
2.5 微卫星DNA | 第20-21页 |
3 微卫星标记及其在濒危动物研究中的应用 | 第21-28页 |
3.1 微卫星DNA及其多态性分析原理 | 第21-22页 |
3.2 微卫星标记的特点 | 第22页 |
3.3 微卫星标记技术的应用方法 | 第22-24页 |
3.3.1 微卫星序列的获得 | 第22页 |
3.3.2 微卫星引物的设计 | 第22-23页 |
3.3.3 微卫星PCR扩增 | 第23页 |
3.3.4 微卫星扩增产物检测 | 第23页 |
3.3.5 微卫星数据处理与分析 | 第23-24页 |
3.4 微卫星标记在濒危动物保护研究中的应用 | 第24-28页 |
3.4.1 种群遗传学 | 第24-25页 |
3.4.2 种群动态与物种进化史 | 第25-26页 |
3.4.3 亲缘关系鉴定 | 第26页 |
3.4.4 交配系统 | 第26-27页 |
3.4.5 物种鉴定 | 第27页 |
3.4.6 个体识别与辅助种群调查 | 第27-28页 |
4 亲权鉴定 | 第28-30页 |
4.1 濒危野生动物亲权鉴定的意义 | 第28页 |
4.2 动物亲权鉴定的方法 | 第28-30页 |
4.2.1 DNA指纹图谱 | 第29页 |
4.2.2 微卫星DNA | 第29-30页 |
4.2.3 线粒体DNA | 第30页 |
5 本研究的目的及意义 | 第30-31页 |
第二章 小熊猫微卫星DNA标记筛选与鉴定 | 第31-44页 |
1 前言 | 第31页 |
2 材料与方法 | 第31-39页 |
2.1 试验材料 | 第31-33页 |
2.1.1 试验对象 | 第31页 |
2.1.2 主要仪器 | 第31-32页 |
2.1.3 主要试验试剂 | 第32页 |
2.1.4 主要溶液配制 | 第32-33页 |
2.2 试验方法 | 第33-38页 |
2.2.1 血样的采集 | 第33页 |
2.2.2 小熊猫血液DNA提取 | 第33-34页 |
2.2.3 引物选择 | 第34-36页 |
2.2.4 PCR反应体系及其条件优化 | 第36页 |
2.2.5 PCR扩增产物的琼脂糖检测 | 第36-37页 |
2.2.6 聚丙烯酰胺凝胶电泳与硝酸银染色检测 | 第37页 |
2.2.7 荧光引物的筛选与组合 | 第37-38页 |
2.2.8 荧光标记引物的PCR扩增 | 第38页 |
2.2.9 多色PCR扩增产物ABI-3730XL DNA Analyzer检测 | 第38页 |
2.3 数据的统计分析 | 第38-39页 |
2.3.1 统计原理 | 第38-39页 |
2.3.2 统计软件 | 第39页 |
3 结果 | 第39-42页 |
3.1 基因组DNA提取 | 第39页 |
3.2 PAGE电泳检测介导的微卫星DNA标记的筛选 | 第39-42页 |
3.3 ABI-3730XL DNA Analyzer介导的微卫星DNA标记鉴定 | 第42页 |
3.3.1 荧光PCR扩增产物的STR分型 | 第42页 |
4 讨论 | 第42-44页 |
第三章 我国圈养小熊猫遗传多样性研究 | 第44-58页 |
1 前言 | 第44页 |
2 材料与方法 | 第44-49页 |
2.1 试验材料 | 第44-45页 |
2.1.1 试验对象 | 第44页 |
2.1.2 主要仪器、试剂及溶液配制 | 第44-45页 |
2.2 试验方法 | 第45-47页 |
2.2.1 血样的采集 | 第45页 |
2.2.2 皮肤与毛发的采集方法 | 第45页 |
2.2.3 小熊猫血液DNA提取 | 第45页 |
2.2.4 小熊猫皮肤DNA提取 | 第45-46页 |
2.2.5 小熊猫毛发DNA提取 | 第46-47页 |
2.2.6 选择引物及PCR反应条件 | 第47页 |
2.2.7 PCR扩增产物的琼脂糖检测 | 第47页 |
2.2.8 荧光PCR引物合成、扩增及产物分型 | 第47页 |
2.3 数据的统计分析 | 第47-49页 |
2.3.1 统计原理 | 第47-49页 |
2.3.2 统计分析 | 第49页 |
3 结果 | 第49-53页 |
3.1 总群体遗传多样性 | 第49-53页 |
3.1.1 11个群体遗传多样性 | 第49-50页 |
3.1.2 14个种群平均期望杂合度 | 第50页 |
3.1.3 圈养种群与野生种群遗传多样性比较 | 第50-51页 |
3.1.4 Hardy-Weinberg平衡定律检验 | 第51页 |
3.1.5 种群遗传分化 | 第51-52页 |
3.1.6 Structure动态分析 | 第52-53页 |
4 讨论 | 第53-58页 |
4.1 种群遗传多样性 | 第53-56页 |
4.1.1 等位基因数量 | 第54页 |
4.1.2 多态信息含量 | 第54页 |
4.1.3 基因丰富度 | 第54-55页 |
4.1.4 圈养群体与野生群体遗传多样性 | 第55页 |
4.1.5 Hardy-Weinberg平衡 | 第55-56页 |
4.2 种群遗传分化 | 第56-57页 |
4.3 Structure动态分析 | 第57-58页 |
第四章 应用微卫星标记进行小熊猫亲权鉴定 | 第58-69页 |
1 前言 | 第58页 |
2 材料与方法 | 第58-61页 |
2.1 试验材料 | 第58-59页 |
2.1.1 试验对象 | 第58页 |
2.1.2 主要仪器、试剂及溶液配制 | 第58-59页 |
2.2 试验方法 | 第59页 |
2.3 引物选择 | 第59-60页 |
2.4 统计分析 | 第60-61页 |
2.4.1 统计学原理 | 第60页 |
2.4.2 统计软件应用 | 第60-61页 |
3 结果 | 第61-67页 |
3.1 各微卫星位点的特征 | 第61页 |
3.2 父权鉴定排除概率 | 第61页 |
3.3 经典亲子鉴定法 | 第61-63页 |
3.4 应用Cervus 3.0软件验证已知双亲后代的鉴定结果 | 第63页 |
3.4.1 19个STR标记的鉴定结果 | 第63页 |
3.4.2 STR标记组合的鉴定结果 | 第63页 |
3.5 应用Cervus 3.0软件鉴定未知父权后代的结果 | 第63页 |
3.5.1 应用7个STR标记的亲权鉴定结果 | 第63页 |
3.5.2 应用19个STR标记的亲权鉴定结果 | 第63页 |
3.6 福州圈养群体遗传谱系 | 第63-65页 |
3.7 群体内亲缘关系 | 第65-67页 |
4 讨论 | 第67-69页 |
4.1 | 第67-69页 |
4.1.1 亲权鉴定 | 第67页 |
4.1.2 双生子卵型鉴定 | 第67页 |
4.1.3 遗传谱系 | 第67-68页 |
4.1.4 种群内亲缘关系 | 第68-69页 |
第五章 结论与保护策略建议 | 第69-71页 |
参考文献 | 第71-80页 |
附录 | 第80-95页 |
致谢 | 第95-96页 |
攻读博士期间发表的论文 | 第96-97页 |