| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-17页 |
| 第一章 引言 | 第17-33页 |
| ·兔巴氏杆菌病概述 | 第17-18页 |
| ·病原学 | 第17页 |
| ·流行病学 | 第17-18页 |
| ·临床症状 | 第18页 |
| ·病理变化 | 第18页 |
| ·多杀性巴氏杆菌毒力因子的研究进展 | 第18-25页 |
| ·荚膜 | 第19页 |
| ·脂多糖 | 第19-20页 |
| ·菌毛和粘附素 | 第20页 |
| ·毒素 | 第20-21页 |
| ·铁调蛋白和铁捕获蛋白 | 第21页 |
| ·唾液酸代谢 | 第21-22页 |
| ·透明质酸酶 | 第22页 |
| ·外膜蛋白 | 第22-23页 |
| ·热休克蛋白 | 第23-25页 |
| ·新陈代谢蛋白 | 第25页 |
| ·多杀性巴氏杆菌疫苗的研究进展 | 第25-27页 |
| ·灭活疫苗 | 第25-26页 |
| ·弱毒疫苗 | 第26页 |
| ·亚单位疫苗 | 第26-27页 |
| ·细菌体内基因差异表达技术的研究进展 | 第27-32页 |
| ·差异显示 RT-PCR（DD-RT-PCR） | 第28页 |
| ·DNA 芯片技术（DNA chip technique） | 第28页 |
| ·抑制消减杂交技术（SSH） | 第28-29页 |
| ·代表性差异分析技术（RDA） | 第29页 |
| ·信号标签诱变技术（STM） | 第29页 |
| ·体内表达技术（IVET） | 第29-30页 |
| ·体内诱导抗原技术（IVIAT） | 第30页 |
| ·选择性抗原捕获转录序列（SCOTS） | 第30-32页 |
| ·研究的目的和意义 | 第32-33页 |
| 第二章 应用 SCOTS 技术筛选多杀性巴氏杆菌在感染兔肝脏中差异表达基因的研究 | 第33-56页 |
| ·材料与方法 | 第33-43页 |
| ·菌株和质粒 | 第33页 |
| ·实验动物和动物试验 | 第33页 |
| ·主要试剂 | 第33-34页 |
| ·主要仪器 | 第34页 |
| ·引物 | 第34-35页 |
| ·C51-17 菌株基因组的提取 | 第35页 |
| ·C51-17 菌株 rDNA 的克隆 | 第35页 |
| ·DNA 的回收与纯化 | 第35-36页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第36页 |
| ·连接与转化 | 第36页 |
| ·重组质粒的提取及鉴定 | 第36-37页 |
| ·rDNA 重组质粒的酶切鉴定 | 第37页 |
| ·C51-17 菌株基因组的生物素标记 | 第37页 |
| ·C51-17 菌株基因组和 rDNA 重组质粒的超声波处理 | 第37页 |
| ·总 RNA 的提取 | 第37-38页 |
| ·双链 cDNA 的合成 | 第38-39页 |
| ·选择性捕获转录序列技术 | 第39-41页 |
| ·SCOTS 克隆的 PCR 鉴定 | 第41页 |
| ·斑点杂交 | 第41-42页 |
| ·阳性 SCOTS 克隆的测序及分析 | 第42页 |
| ·Real-time RT-PCR 验证差异表达基因 | 第42-43页 |
| ·结果 | 第43-51页 |
| ·C51-17 菌株基因组的提取结果 | 第43页 |
| ·C51-17 菌株 rDNA PCR 扩增结果 | 第43-44页 |
| ·rDNA 重组质粒的鉴定 | 第44-45页 |
| ·生物素标记的 C51-17 菌株基因组及 rDNA 重组质粒的破碎 | 第45页 |
| ·总 RNA 的提取及反转录 | 第45-46页 |
| ·SCOTS 结果 | 第46-48页 |
| ·差异表达基因的 PCR 鉴定 | 第48页 |
| ·斑点杂交结果 | 第48-49页 |
| ·感染相关基因的功能注释 | 第49页 |
| ·差异表达基因的 Real-time RT-PCR 验证结果 | 第49-51页 |
| ·分析和讨论 | 第51-55页 |
| ·反向斑点杂交技术 | 第51-52页 |
| ·SCOTS 与其他差异表达基因筛选技术的比较 | 第52页 |
| ·新陈代谢蛋白 | 第52-53页 |
| ·细胞表面蛋白 | 第53页 |
| ·调控蛋白 | 第53-55页 |
| ·转运蛋白 | 第55页 |
| ·小结 | 第55-56页 |
| 第三章 兔多杀性巴氏杆菌热休克蛋白 DnaK 的表达及其生物学活性 | 第56-72页 |
| ·材料与方法 | 第56-62页 |
| ·菌株、质粒和细胞 | 第56页 |
| ·实验动物 | 第56页 |
| ·引物 | 第56页 |
| ·主要试剂 | 第56-57页 |
| ·主要仪器 | 第57页 |
| ·C51-17 菌株 dnaK 基因的扩增 | 第57页 |
| ·C51-17 菌株 dnaK 基因序列分析 | 第57-58页 |
| ·重组表达质粒的构建 | 第58页 |
| ·DnaK 蛋白的表达与纯化 | 第58-59页 |
| ·DnaK 蛋白的 ATPase 活性检测 | 第59-60页 |
| ·DnaK 蛋白免疫小鼠的免疫保护试验 | 第60页 |
| ·DnaK 蛋白免疫小鼠的抗体水平检测 | 第60页 |
| ·DnaK 蛋白免疫小鼠的细胞免疫检测 | 第60-61页 |
| ·DnaK 蛋白在细胞内的分布 | 第61页 |
| ·DnaK 蛋白粘附定位的检测 | 第61-62页 |
| ·DnaK 蛋白粘附抑制的检测 | 第62页 |
| ·结果 | 第62-70页 |
| ·C51-17 菌株 dnaK 基因的扩增结果 | 第62页 |
| ·C51-17 菌株 dnaK 基因序列比对结果 | 第62-63页 |
| ·DnaK 蛋白抗原性分析结果 | 第63页 |
| ·DnaK 蛋白功能结构域分析结果 | 第63-64页 |
| ·DnaK 重组表达质粒的构建结果 | 第64页 |
| ·DnaK 蛋白表达纯化结果 | 第64-65页 |
| ·DnaK 蛋白 ATPase 检测结果 | 第65-66页 |
| ·DnaK 蛋白免疫小鼠的抗体水平检测结果 | 第66-67页 |
| ·DnaK 蛋白免疫小鼠的细胞免疫检测结果 | 第67-68页 |
| ·DnaK 蛋白免疫小鼠的免疫保护试验结果 | 第68页 |
| ·DnaK 蛋白在细胞内的分布检测结果 | 第68-69页 |
| ·DnaK 蛋白粘附定位检测结果 | 第69页 |
| ·DnaK 蛋白粘附抑制的检测结果 | 第69-70页 |
| ·分析和讨论 | 第70-71页 |
| ·DnaK 的序列分析 | 第70-71页 |
| ·DnaK 蛋白的免疫保护分析 | 第71页 |
| ·小结 | 第71-72页 |
| 第四章 兔多杀性巴氏杆菌ΔdnaK 和ΔaroA 突变株的构建及其对小鼠的致病性 | 第72-83页 |
| ·材料与方法 | 第72-75页 |
| ·菌株和质粒 | 第72页 |
| ·实验动物 | 第72页 |
| ·引物 | 第72-73页 |
| ·主要试剂 | 第73页 |
| ·主要仪器 | 第73页 |
| ·aroA 基因同源臂的扩增 | 第73页 |
| ·自杀性重组质粒的构建 | 第73-74页 |
| ·C51-17 菌株电转化感受态细胞的制备 | 第74页 |
| ·突变株的筛选及鉴定 | 第74-75页 |
| ·突变株的生物学特性 | 第75页 |
| ·突变株的致病性试验 | 第75页 |
| ·结果 | 第75-80页 |
| ·上下游同源臂的扩增结果 | 第75-76页 |
| ·重组性重组质粒的鉴定结果 | 第76-77页 |
| ·突变株的鉴定结果 | 第77页 |
| ·突变株的体外培养特性 | 第77-78页 |
| ·突变株的遗传稳定性测定结果 | 第78-79页 |
| ·突变株的体外生长曲线测定结果 | 第79页 |
| ·突变株对小鼠的致病性结果 | 第79-80页 |
| ·分析和讨论 | 第80-82页 |
| ·细菌突变体构建技术 | 第80页 |
| ·突变株的致病性 | 第80-81页 |
| ·细菌活载体疫苗的研究 | 第81-82页 |
| ·小结 | 第82-83页 |
| 第五章 全文结论 | 第83-84页 |
| 参考文献 | 第84-98页 |
| 致谢 | 第98-99页 |
| 作者简历 | 第99-100页 |
| 附件 | 第100页 |
