| 摘要 | 第5-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 第一章 前言 | 第12-25页 |
| 1.1 研究背景 | 第12-14页 |
| 1.2 海洋来源的芽孢杆菌产生的活性物质 | 第14-21页 |
| 1.2.1 脂肽类化合物 | 第14-16页 |
| 1.2.2 异香豆素类 | 第16-17页 |
| 1.2.3 脂肪酸类 | 第17-18页 |
| 1.2.4 聚酮类化合物 | 第18-19页 |
| 1.2.5 糖苷类 | 第19-21页 |
| 1.3 糖基转移酶 | 第21-23页 |
| 1.3.1 糖基转移酶的结构类型 | 第21页 |
| 1.3.2 糖基转移酶的分类 | 第21-22页 |
| 1.3.3 糖基转移酶的作用机制及糖基侧链改造 | 第22-23页 |
| 1.4 Macrolactins生物合成研究 | 第23-24页 |
| 1.5 课题研究目的及意义 | 第24-25页 |
| 第二章 海洋芽孢杆菌B-9987中Macrolactins生物合成相关调控基因的研究 | 第25-53页 |
| 2.1 引言 | 第25页 |
| 2.2 实验材料 | 第25-30页 |
| 2.2.1 菌株与质粒 | 第25-26页 |
| 2.2.2 引物 | 第26页 |
| 2.2.3 所用培养基和生化试剂 | 第26-29页 |
| 2.2.4 主要实验试剂及仪器 | 第29-30页 |
| 2.3 实验方法 | 第30-38页 |
| 2.3.1 大肠杆菌质粒DNA的提取 | 第31页 |
| 2.3.2 芽孢杆菌质粒DNA的提取 | 第31-32页 |
| 2.3.3 芽孢杆菌总DNA的提取 | 第32-33页 |
| 2.3.4 琼脂糖凝胶电泳中DNA片段的胶回收(参照OMEGA试剂盒说明书) | 第33-34页 |
| 2.3.5 连接反应 | 第34页 |
| 2.3.6 大肠杆菌感受态细胞的制备及电转化 | 第34-35页 |
| 2.3.7 大肠杆菌中质粒的快速抽提检测 | 第35页 |
| 2.3.8 海洋芽孢杆菌B-9987电转化感受态细胞的制备及电转化 | 第35-36页 |
| 2.3.9 PCR及相关技术 | 第36-37页 |
| 2.3.10 B-9987发酵及发酵液的HPLC分析 | 第37-38页 |
| 2.3.11 生物膜观察 | 第38页 |
| 2.4 结果与分析 | 第38-51页 |
| 2.4.1 bm0677基因的生物信息学分析 | 第38-39页 |
| 2.4.2 基因bm0677的双交换阻断突变株的构建 | 第39-41页 |
| 2.4.3 基因bm0677的高表达株的构建 | 第41-42页 |
| 2.4.4 突变株和高表达株的表型分析 | 第42-51页 |
| 2.5 本章小结 | 第51-53页 |
| 第三章 BmmGT1酶反应条件研究 | 第53-66页 |
| 3.1 引言 | 第53页 |
| 3.2 实验材料 | 第53-54页 |
| 3.2.1 实验菌株 | 第53页 |
| 3.2.2 所用培养基 | 第53页 |
| 3.2.3 实验试剂及仪器 | 第53-54页 |
| 3.3 实验方法 | 第54-57页 |
| 3.3.1 酶反应底物的制备 | 第54页 |
| 3.3.2 蛋白质的表达纯化 | 第54-56页 |
| 3.3.3 聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第56-57页 |
| 3.3.4 蛋白质浓度测定 | 第57页 |
| 3.4 结果与分析 | 第57-65页 |
| 3.4.1 酶反应底物Macrolactin A的制备分离 | 第57-58页 |
| 3.4.2 BmmGT1的纯化表达 | 第58-59页 |
| 3.4.3 BmmGT1的酶反应条件的摸索 | 第59-65页 |
| 3.5 本章小结 | 第65-66页 |
| 第四章 新颖结构Macrolactins的制备及结构鉴定 | 第66-85页 |
| 4.1 引言 | 第66页 |
| 4.2 实验材料 | 第66页 |
| 4.2.1 主要实验仪器 | 第66页 |
| 4.3 实验方法 | 第66-67页 |
| 4.3.1 糖基化产物的分离方法 | 第66-67页 |
| 4.4 结构解析 | 第67-84页 |
| 4.4.1 化合物10的结构解析 | 第69-73页 |
| 4.4.2 化合物11的结构解析 | 第73-77页 |
| 4.4.3 化合物12的结构解析 | 第77-81页 |
| 4.4.4 化合物13结构解析 | 第81-84页 |
| 4.5 本章小结 | 第84-85页 |
| 第五章 总结与展望 | 第85-87页 |
| 5.1 工作总结 | 第85页 |
| 5.2 主要创新点 | 第85-86页 |
| 5.3 工作展望 | 第86-87页 |
| 参考文献 | 第87-92页 |
| 致谢 | 第92-93页 |
| 符号简写(Abbreviation) | 第93页 |
