| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 第一章 微生物新颖次生代谢产物的挖掘策略 | 第14-23页 |
| 前言 | 第14-15页 |
| 1 通过生物信息学预测发现新颖次级代谢产物 | 第15-18页 |
| 1.1 基于预测结构单元发现新颖次级代谢产物 | 第16-17页 |
| 1.1.1 Aspoquinolones A-D | 第16-17页 |
| 1.2 基于预测生物合成前体发现新颖次级代谢产物 | 第17-18页 |
| 1.2.1 Orfamides A-C | 第17页 |
| 1.2.2 Erythrochelin | 第17-18页 |
| 2 通过代谢组比较发现新颖次级代谢产物 | 第18-20页 |
| 2.1 Emericellamides A和C-F | 第19页 |
| 2.2 Myxochromides S1-S3和aurafuron | 第19-20页 |
| 3 异源表达激活生物合成基因(簇) | 第20-21页 |
| 3.1 Avermitilol | 第20-21页 |
| 4 过表达正调控基因或敲除负调控基因激活生物合成基因(簇) | 第21页 |
| 4.1 Aspyridones A和B | 第21页 |
| 本章小结 | 第21-23页 |
| 第二章 少孢节丛孢中杂合生源类化合物(TPS/PKS)生物合成相关基因(簇)的筛选 | 第23-41页 |
| 引言 | 第23-24页 |
| 1 实验方法 | 第24-25页 |
| 2 结果与分析 | 第25-39页 |
| 2.1 少孢素生物合成基因簇的筛选 | 第25-31页 |
| 2.2 其他生物合成相关基因的筛选 | 第31-33页 |
| 2.3 系统发育树分析 | 第33-39页 |
| 3 讨论 | 第39-41页 |
| 第三章 少孢节丛孢中15个生物合成基因(簇)的敲除 | 第41-65页 |
| 引言 | 第41页 |
| 1 实验材料和仪器 | 第41-43页 |
| 1.1 实验所用培养基 | 第41页 |
| 1.2 供试菌株和所用质粒 | 第41-42页 |
| 1.3 主要试剂 | 第42页 |
| 1.4 主要仪器设备 | 第42-43页 |
| 2 实验方法 | 第43-53页 |
| 2.1 敲除载体的构建原理 | 第43页 |
| 2.2 敲除载体引物设计 | 第43-48页 |
| 2.3 少孢节丛孢基因组DNA提取 | 第48页 |
| 2.4 质粒pAg1-H3的提取 | 第48页 |
| 2.5 扩增目的基因的上下游同源片段 | 第48-49页 |
| 2.6 化转DH5α | 第49-50页 |
| 2.7 大肠杆菌转化子的验证 | 第50页 |
| 2.8 少孢节丛孢原生质体的转化 | 第50-51页 |
| 2.9 敲除转化子的PCR验证 | 第51-53页 |
| 2.10 敲除转化子的Southern blot验证 | 第53页 |
| 3 实验结果 | 第53-64页 |
| 3.1 少孢节从孢中15个目的基因5’端和3’端同源片段扩增 | 第53-54页 |
| 3.2 少孢节从孢中15个目的基因敲除质粒PCR结果 | 第54页 |
| 3.3 真菌转化子验证结果 | 第54-62页 |
| 3.4 转化子Southern blot验证 | 第62-64页 |
| 4 小结 | 第64-65页 |
| 第四章 少孢节丛孢敲除菌株与野生菌株的表型比较和分析 | 第65-85页 |
| 前言 | 第65页 |
| 1 实验材料及仪器 | 第65页 |
| 1.1 供试菌株 | 第65页 |
| 1.2 主要培养基 | 第65页 |
| 1.3 主要仪器及设备 | 第65页 |
| 2 实验方法 | 第65-66页 |
| 2.1 菌丝生长情况观察 | 第65-66页 |
| 2.2 产孢量及孢子萌发率观察 | 第66页 |
| 2.3 产捕器和线虫捕食能力的观察 | 第66页 |
| 3 实验结果 | 第66-83页 |
| 3.1 菌丝生长情况 | 第66-78页 |
| 3.1.1 野生型与△80g121突变菌在PDA、YMA、TYGA培养基中的菌丝生长情况 | 第66-68页 |
| 3.1.2 野生型与△215g22突变菌在PDA、YMA、TYGA培养基中的菌丝生长情况 | 第68-70页 |
| 3.1.3 野生型与△215g283突变菌在PDA、YMA、TYGA培养基中的菌丝生长情况 | 第70-72页 |
| 3.1.4 野生型与△215g281突变菌在PDA、YMA、TYGA培养基中的菌丝生长情况 | 第72-74页 |
| 3.1.5 野生型与△215g280突变菌在PDA、YMA、TYGA培养基中的菌丝生长情况 | 第74-76页 |
| 3.1.6 野生型与△215g276突变菌在PDA、YMA、TYGA培养基中的菌丝生长情况 | 第76-78页 |
| 3.2 孢子形成 | 第78-80页 |
| 3.2.1 产量比较 | 第78-79页 |
| 3.2.2 萌发率比较 | 第79-80页 |
| 3.3 捕器与捕食线虫能力比较 | 第80-83页 |
| 3.3.1 野生型与△80g121突变菌捕器与捕食线虫能力比较 | 第80-81页 |
| 3.3.2 野生型与△215g22突变菌捕器与捕食线虫能力比较 | 第81-82页 |
| 3.3.3 野生型与△215g283突变菌捕器与捕食线虫能力比较 | 第82-83页 |
| 4 讨论 | 第83-85页 |
| 第五章 突变菌株与野生型的代谢图谱检测分析 | 第85-134页 |
| 引言 | 第85页 |
| 1 实验材料及仪器 | 第85-86页 |
| 1.1 供试菌株 | 第85页 |
| 1.2 实验所用培养基 | 第85页 |
| 1.3 实验所用仪器 | 第85-86页 |
| 2 实验方法 | 第86-88页 |
| 2.1 菌株发酵和发酵液处理 | 第86页 |
| 2.2 HPLC分析方法 | 第86-87页 |
| 2.3 气相色谱-质谱(GC-MS)检测方法 | 第87页 |
| 2.4 差异化合物的分离鉴定 | 第87-88页 |
| 3 实验结果与分析 | 第88-130页 |
| 3.1 突变菌株△80g121与野生型HPLC和GC-MS检测结果与分析 | 第88-90页 |
| 3.2 突变菌株△215g22与野生型HPLC和GC-MS检测结果与分析 | 第90-92页 |
| 3.3 突变菌株△215g283与野生型HPLC和GC-MS检测结果与分析 | 第92-95页 |
| 3.4 突变菌株△215g282与野生型HPLC和GC-MS检测结果与分析 | 第95-99页 |
| 3.5 突变菌株△215g281与野生型HPLC和GC-MS检测结果与分析 | 第99-102页 |
| 3.6 突变菌株△215g280与野生型HPLC和GC-MS检测结果与分析 | 第102-106页 |
| 3.7 突变菌株△215g279与野生型HPLC和GC-MS检测结果与分析 | 第106-109页 |
| 3.8 突变菌株△215g278与野生型HPLC和GC-MS检测结果与分析 | 第109-112页 |
| 3.9 突变菌株△215g277与野生型HPLC和GC-MS检测结果与分析 | 第112-115页 |
| 3.10 突变菌株△215g276与野生型HPLC和GC-MS检测结果与分析 | 第115-119页 |
| 3.11 突变菌株△215g275与野生型HPLC和GC-MS检测结果与分析 | 第119-122页 |
| 3.12 突变菌株△215g274与野生型HPLC和GC-MS检测结果与分析 | 第122-125页 |
| 3.13 突变菌株△215g926与野生型HPLC和GC-MS检测结果与分析 | 第125-128页 |
| 3.14 突变菌株215g277-283与野生型HPLC和GC-MS检测结果与分析 | 第128-130页 |
| 4 讨论 | 第130-134页 |
| 第六章 突变菌株和野生型菌株表达谱差异分析 | 第134-142页 |
| 引言 | 第134页 |
| 1 实验材料 | 第134页 |
| 1.1 供试菌株 | 第134页 |
| 1.2 实验所用培养基 | 第134页 |
| 1.3 实验所用仪器 | 第134页 |
| 2 实验方法 | 第134-135页 |
| 2.1 菌株发酵和发酵液处理 | 第134-135页 |
| 2.2 突变菌和野生型RNA-Seq测序 | 第135页 |
| 3 实验结果 | 第135-141页 |
| 4 讨论 | 第141-142页 |
| 全文总结 | 第142-148页 |
| 参考文献 | 第148-156页 |
| 附录 | 第156-189页 |
| 附录1 突变菌株和野生型菌株发酵液粗提物GC-MS检测化合物比较结果图 | 第156-187页 |
| 附录2 硕士阶段发表或参与撰写的论文 | 第187-188页 |
| 附录3 硕士阶段获得的奖励和荣誉 | 第188-189页 |
| 致谢 | 第189-190页 |
