| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 符号与缩略语说明 | 第12-13页 |
| 前言 | 第13-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-22页 |
| 1 氨基甲酸酯类农药发展史 | 第14-16页 |
| 2 呋喃丹的性质和对环境的危害 | 第16-18页 |
| 2.1 呋喃丹的性质 | 第16页 |
| 2.2 呋喃丹对环境的危害 | 第16-18页 |
| 3 微生物降解呋喃丹的研究进展 | 第18-21页 |
| 4 本研究的目的和意义 | 第21-22页 |
| 第二章 Sphingomonas sp. CDS-1突变文库的构建及筛选 | 第22-40页 |
| 1 材料与方法 | 第23-31页 |
| 1.1 试剂与培养基 | 第23页 |
| 1.2 供试菌株与质粒 | 第23-24页 |
| 1.3 菌株的培养条件 | 第24页 |
| 1.4 CDS-1突变株文库的构建 | 第24页 |
| 1.5 突变株的筛选 | 第24-25页 |
| 1.6 突变株对呋喃丹和呋喃酚降解能力的测定 | 第25页 |
| 1.7 样品的制备及分析 | 第25页 |
| 1.8 菌株基因组DNA的提取 | 第25-26页 |
| 1.9 突变株基因组中插入序列的检测 | 第26-27页 |
| 1.10 插入位点上下游序列的SEFA-PCR扩增 | 第27-29页 |
| 1.11 DNA片段回收 | 第29页 |
| 1.12 PCR产物的T/A克隆和酶连产物的转化 | 第29-30页 |
| 1.13 感受态细胞的制备 | 第30页 |
| 1.14 质粒DNA的提取 | 第30页 |
| 1.15 SEFA-PCR产物的测序与分析 | 第30-31页 |
| 2 结果与分析 | 第31-38页 |
| 2.1 突变株文库的建立及筛选 | 第31-33页 |
| 2.2 突变株中插入转座子序列的PCR验证 | 第33-34页 |
| 2.3 突变株中转座子插入位置上下游序列的PCR扩增 | 第34-35页 |
| 2.4 克隆基因的组装与分析 | 第35-38页 |
| 3 本章小结 | 第38-40页 |
| 第三章 酯酶基因cehA的克隆和功能验证 | 第40-64页 |
| 1 材料与方法 | 第40-49页 |
| 1.1 试剂与培养基 | 第40-41页 |
| 1.2 供试菌株与质粒 | 第41页 |
| 1.3 酯酶基因cehA的敲除 | 第41-44页 |
| 1.4 cehA功能回补(利用原始启动子) | 第44-46页 |
| 1.5 酯酶基因cehA的异源表达 | 第46-49页 |
| 1.6 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第49页 |
| 1.7 表达菌株对呋喃丹的降解 | 第49页 |
| 2 结果分析 | 第49-62页 |
| 2.1 酯酶基因cehA的敲除 | 第49-51页 |
| 2.2 CDKA降解特性的研究 | 第51-53页 |
| 2.3 酯酶基因cehA的回补 | 第53-60页 |
| 2.4 cehA的异源表达 | 第60-62页 |
| 3 结果讨论 | 第62-64页 |
| 第四章 单加氧酶基因簇orfABC的功能鉴定 | 第64-92页 |
| 1 材料与方法 | 第64-73页 |
| 1.1 试剂与培养基 | 第64页 |
| 1.2 供试菌株与质粒 | 第64-65页 |
| 1.3 单加氧酶基因orfC的敲除 | 第65-68页 |
| 1.4 功能回补 | 第68-70页 |
| 1.5 重组菌RW-C降解呋喃酚产物的鉴定 | 第70页 |
| 1.6 单加氧酶基因orfC的异源表达 | 第70-73页 |
| 1.7 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第73页 |
| 1.8 表达菌株的降解特性 | 第73页 |
| 2 结果分析 | 第73-90页 |
| 2.1 单加氧酶基因orfC的敲除 | 第73-75页 |
| 2.2 CDKC降解特性的研究 | 第75-77页 |
| 2.3 orfABC基因的回补 | 第77-79页 |
| 2.4 orfBC基因的回补 | 第79-81页 |
| 2.5 orfC基因的回补 | 第81-83页 |
| 2.6 单加氧酶基因orfC在不同宿主中的表达 | 第83-85页 |
| 2.7 呋喃酚下游产物LC-MS鉴定 | 第85-87页 |
| 2.8 单加氧酶orfC的异源表达 | 第87-90页 |
| 3 结果与讨论 | 第90-92页 |
| 参考文献 | 第92-100页 |
| 全文总结 | 第100-102页 |
| 论文主要创新点 | 第102-104页 |
| 附录一 文中所用培养基及试剂配方 | 第104-108页 |
| 附录二 相关基因序列 | 第108-116页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第116-118页 |
| 致谢 | 第118页 |
