| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-14页 |
| 缩略语 | 第14-15页 |
| 第一章 eIF4E 的研究进展 | 第15-24页 |
| 1 前言 | 第15页 |
| 2 eIF4E 的发现及其家族成员 | 第15-16页 |
| 3 eIF4E 的结构 | 第16-17页 |
| 4 生物学功能 | 第17-19页 |
| ·eIF4E 和帽依赖mRNA 的翻译 | 第17-18页 |
| ·eIF4E 和核质转运 | 第18页 |
| ·eIF4E 与无帽病毒mRNA 的翻译 | 第18-19页 |
| 5 eIF4E 的活性调节机制 | 第19-21页 |
| ·eIF4E 磷酸化 | 第19-20页 |
| ·eIF4E 抑制蛋白的磷酸化 | 第20页 |
| ·eIF4E 的基因调控 | 第20-21页 |
| 6 eIF4E与肿瘤 | 第21-22页 |
| 7 展望 | 第22-24页 |
| 第二章 实验方案设计 | 第24-26页 |
| 1 研究目的和意义 | 第24页 |
| 2 研究内容 | 第24-25页 |
| 3 实验流程图 | 第25-26页 |
| 第三章 生物信息学分析 | 第26-35页 |
| 1 生物信息学工具 | 第26页 |
| 2 方法 | 第26-27页 |
| 3 结果 | 第27-33页 |
| ·BmeIF4E 基因的序列 | 第27-28页 |
| ·BmeIF4E 基因内含子与外显子分析 | 第28页 |
| ·疏水性分析 | 第28-29页 |
| ·跨膜区预测分析 | 第29页 |
| ·信号肽分析 | 第29-30页 |
| ·BmeIF4E 在细胞中定位的分析 | 第30-31页 |
| ·BmeIF4E 的二级结构预测 | 第31页 |
| ·BmeIF4E 的高级结构预测 | 第31-32页 |
| ·BmeIF4E 氨基酸序列的同源性分析 | 第32页 |
| ·进化树的构建 | 第32-33页 |
| 4 讨论 | 第33-35页 |
| 第四章 BmeIF4E 基因的克隆、表达、纯化及抗体制备 | 第35-59页 |
| 1 试剂与材料 | 第35-42页 |
| ·材料与设备 | 第35页 |
| ·试剂 | 第35-36页 |
| ·主要试剂的配制 | 第36-42页 |
| ·大肠杆菌培养基 | 第36页 |
| ·抗生素 | 第36页 |
| ·碱裂解法提取质粒DNA 用溶液 | 第36-37页 |
| ·核酸电泳所用溶液 | 第37-38页 |
| ·测序用溶液 | 第38页 |
| ·SDS-PAGE 用溶液 | 第38-39页 |
| ·镍柱亲和层析纯化用试剂 | 第39页 |
| ·反相FPLC 纯化用试剂 | 第39页 |
| ·Bradford 检测用试剂 | 第39-40页 |
| ·抗体制备用试剂 | 第40页 |
| ·ELISA 用溶液 | 第40-41页 |
| ·抗体纯化用试剂 | 第41页 |
| ·Western blot 用试剂 | 第41-42页 |
| 2 方法 | 第42-53页 |
| ·BmeIF4E 基因的克隆 | 第42-46页 |
| ·家蚕蛹总RNA 的提取 | 第42页 |
| ·cDNA 第一链的合成 | 第42页 |
| ·PCR 扩增 | 第42-43页 |
| ·PCR 产物与表达载体pET-28a(+)的双酶切 | 第43页 |
| ·酶切产物的纯化 | 第43-44页 |
| ·连接反应 | 第44页 |
| ·E.coli 感受态细胞的制备（CaC1_2 法）[61] | 第44页 |
| ·连接产物的转化 | 第44-45页 |
| ·重组克隆的筛选与鉴定 | 第45-46页 |
| ·BmeIF4E 基因序列的测定 | 第46-47页 |
| ·重组质粒的转化及鉴定 | 第47页 |
| ·重组质粒在大肠杆菌中的表达 | 第47页 |
| ·SDS-PAGE 电泳分析 | 第47-48页 |
| ·镍亲和柱纯化融合蛋白 | 第48-49页 |
| ·融合蛋白的FPLC 纯化和分子量的质谱鉴定 | 第49页 |
| ·融合蛋白的FPLC 纯化 | 第49页 |
| ·融合蛋白分子量的质谱鉴定 | 第49页 |
| ·抗体制备 | 第49-51页 |
| ·Bradford 法测蛋白含量 | 第49-50页 |
| ·抗原制备 | 第50页 |
| ·免疫动物 | 第50-51页 |
| ·多克隆抗血清制备 | 第51页 |
| ·间接ELISA 法测定多克隆抗血清效价 | 第51-52页 |
| ·抗体的纯化 | 第52页 |
| ·Western blot 检测抗体特异性 | 第52-53页 |
| 3 结果 | 第53-58页 |
| ·家蚕蛹总RNA 琼脂糖电泳检测 | 第53页 |
| ·RT-PCR 扩增BmeIF4E 基因完整的ORF 序列 | 第53页 |
| ·重组质粒pET-28a(+)-BmeIF4E 双酶切鉴定 | 第53-54页 |
| ·重组质粒pET-28a(+)-BmeIF4E 的序列测定 | 第54页 |
| ·重组蛋白BmeIF4E 在E.coli BL21 (DE3)中诱导表达及纯化 | 第54-55页 |
| ·FPLC 分离纯化重组蛋白BmeIF4E | 第55页 |
| ·质谱鉴定重组蛋白BmeIF4E | 第55-56页 |
| ·抗BmeIF4E 的多克隆抗体的纯化 | 第56-57页 |
| ·抗BmeIF4E 的多克隆抗体效价测定 | 第57页 |
| ·Western blot 检测 | 第57-58页 |
| 4 讨论 | 第58-59页 |
| 第五章 BmeIF4E 基因的表达差异性分析 | 第59-70页 |
| 1 材料与试剂 | 第59-60页 |
| ·材料 | 第59页 |
| ·试剂 | 第59页 |
| ·试剂配制 | 第59-60页 |
| 2 方法 | 第60-64页 |
| ·总RNA 的提取 | 第60-61页 |
| ·DNA 酶的消化 | 第61页 |
| ·cDNA 第一链的合成 | 第61页 |
| ·荧光定量PCR 引物的设计 | 第61-62页 |
| ·荧光定量PCR | 第62-63页 |
| ·荧光定量PCR 数据分析 | 第63页 |
| ·总蛋白质的提取及定量 | 第63页 |
| ·Western blot 检测BmeIF4E 蛋白的分布 | 第63-64页 |
| 3 结果 | 第64-68页 |
| ·家蚕发育过程中BmeIF4E 的mRNA 量的变化 | 第64-65页 |
| ·家蚕发育过程中BmeIF4E 蛋白表达量的变化 | 第65-66页 |
| ·家蚕五龄幼虫各组织中BmeIF4E 的m RNA 量的变化 | 第66-67页 |
| ·家蚕五龄幼虫各组织中BmeIF4E 表达量的变化 | 第67-68页 |
| 4 讨论 | 第68-70页 |
| 第六章 BmeIF4E 的亚细胞定位 | 第70-74页 |
| 1 试剂与材料 | 第70页 |
| ·材料与设备 | 第70页 |
| ·试剂 | 第70页 |
| 2 方法 | 第70-71页 |
| 3 结果 | 第71-72页 |
| 4 讨论 | 第72-74页 |
| 第七章 BmeIF4E 的RNA 干扰 | 第74-81页 |
| 1 材料与试剂 | 第74页 |
| ·材料 | 第74页 |
| ·试剂 | 第74页 |
| 2 方法 | 第74-77页 |
| ·合成BmeIF4E 的dsRNA | 第74-76页 |
| ·获得正负链RNA 的转录模板 | 第74-75页 |
| ·合成dsRNA | 第75-76页 |
| ·测定dsRNA 的浓度 | 第76页 |
| ·Bm5 细胞的转染 | 第76页 |
| ·Western blot 检测RNA 干扰前后BmeIF4E 蛋白含量的变化 | 第76-77页 |
| ·细胞蛋白的提取及定量 | 第76-77页 |
| ·Western blot 检测 | 第77页 |
| ·MTT 法检测细胞活力变化 | 第77页 |
| 3 结果 | 第77-79页 |
| ·dsRNA 的合成 | 第77-78页 |
| ·dsRNA 的定量 | 第78页 |
| ·Western blot 检测 BmeIF4E 的干扰效果 | 第78-79页 |
| ·MTT 法检测细胞活力 | 第79页 |
| 4 讨论 | 第79-81页 |
| 结论 | 第81-82页 |
| 参考文献 | 第82-86页 |
| 致谢 | 第86-87页 |
| 在学期间发表的论文 | 第87页 |
