| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 文献综述 | 第10-15页 |
| 1.1 茶叶香气研究进展 | 第10页 |
| 1.2 茶树中香气前体研究进展 | 第10-12页 |
| 1.3 茶树内源糖苷酶研究概况 | 第12-15页 |
| 1.3.1 β-樱草糖苷酶的研究进展 | 第12-13页 |
| 1.3.2 β-葡萄糖苷酶的研究进展 | 第13-15页 |
| 2 引言 | 第15-18页 |
| 2.1 研究意义及目的 | 第15-16页 |
| 2.2 研究内容 | 第16页 |
| 2.3 技术路线 | 第16-18页 |
| 3 材料与方法 | 第18-36页 |
| 3.1 实验材料 | 第18-19页 |
| 3.2 仪器与试剂 | 第19-20页 |
| 3.2.1 主要实验仪器 | 第19页 |
| 3.2.2 主要试剂 | 第19页 |
| 3.2.3 主要试剂配方 | 第19-20页 |
| 3.3 方法 | 第20-36页 |
| 3.3.1 茶树Pri、Glu基因的克隆、重组载体构建以及在大肠杆菌中的表达 | 第20-29页 |
| 3.3.2 茶树Glu基因的克隆、重组载体构建以及在酿酒酵母中的表达 | 第29-33页 |
| 3.3.3 茶叶Pri、Glu实时荧光定量PCR | 第33-35页 |
| 3.3.4 β-葡萄糖苷酶在茶鲜叶采后摊放过程中酶活性变化 | 第35-36页 |
| 4 结果与分析 | 第36-53页 |
| 4.1 RNA的提取与检测 | 第36页 |
| 4.2 茶树Pri、Glu基因表达载体构建及在大肠杆菌中的表达 | 第36-43页 |
| 4.2.1 Pri、Glu ORF的扩增 | 第36-37页 |
| 4.2.2 Pri、Glu基因的原核表达载体的构建和双酶切鉴定 | 第37-38页 |
| 4.2.3 Pri、Glu基因的原核表达 | 第38-41页 |
| 4.2.4 融合蛋白的纯化 | 第41-43页 |
| 4.3 Pri、Glu多克隆抗体的制备及鉴定 | 第43-45页 |
| 4.3.1 多克隆抗体的效价鉴定 | 第43-44页 |
| 4.3.2 多克隆抗体的Western-blot检测 | 第44-45页 |
| 4.4 Glu基因真核表达 | 第45-48页 |
| 4.4.1 Glu基因ORF的扩增 | 第45-46页 |
| 4.4.2 Glu基因的真核表达载体的构建和双酶切鉴定 | 第46页 |
| 4.4.3 Glu基因的真核表达 | 第46-47页 |
| 4.4.4 Glu的Western-bolt检测 | 第47页 |
| 4.4.5 Glu的酶活性检测 | 第47-48页 |
| 4.5 不同茶树品种中Pri、Glu基因的表达差异 | 第48-50页 |
| 4.5.1 RNA样品质量检测 | 第48页 |
| 4.5.2 Pri、Glu基因表达的实时定量PCR分析 | 第48-50页 |
| 4.6 β-葡萄糖苷酶在茶鲜叶采后摊放过程中酶活性变化 | 第50-53页 |
| 4.6.1 对硝基苯酚标准曲线 | 第50页 |
| 4.6.2 含水量的变化 | 第50-51页 |
| 4.6.3 萎凋过程中酶活性的变化 | 第51-53页 |
| 5 讨论 | 第53-56页 |
| 5.1 重组PCR技术克隆基因 | 第53页 |
| 5.2 茶树Pri、Glu基因的克隆与表达 | 第53-54页 |
| 5.3 茶树Pri、Glu多克隆抗体的制备 | 第54-55页 |
| 5.4 在茶树中Pri、Glu两个基因表达差异 | 第55页 |
| 5.5 茶叶摊放过程中 β-葡萄糖苷酶活性变化 | 第55-56页 |
| 6 结论 | 第56-57页 |
| 6.1 茶树Pri、Glu基因的克隆与原核表达 | 第56页 |
| 6.2 Pri、Glu多克隆抗体的制备及鉴定 | 第56页 |
| 6.3 Glu基因的真核表达 | 第56页 |
| 6.4 Pri、Glu基因在不同茶树品种中的表达差异 | 第56页 |
| 6.5 β-葡萄糖苷酶在茶鲜叶采后摊放过程中酶活性变化 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-61页 |
| 附录A.中英文缩写与注释 | 第61-62页 |
| 附录B.Pri基因的测序结果 | 第62-63页 |
| 附录C.去信号肽Pri基因的测序结果 | 第63-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 作者简介 | 第65页 |
