| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 1 文献综述 | 第11-20页 |
| 1.1 细胞凋亡概述 | 第11页 |
| 1.2 凋亡相关基因家族概述 | 第11-12页 |
| 1.2.1 BCL-2基因家族 | 第11页 |
| 1.2.2 Fas/FasL基因 | 第11-12页 |
| 1.2.3 Caspase基因家族 | 第12页 |
| 1.3 Caspase介导的细胞凋亡信号通路 | 第12-15页 |
| 1.4 细胞凋亡与精子发生发育 | 第15-16页 |
| 1.5 猪冷冻精液人工授精现状及存在的问题 | 第16-17页 |
| 1.6 精子冷冻损伤 | 第17-18页 |
| 1.7 冷冻保存对精子凋亡相关基因表达的影响 | 第18-19页 |
| 1.8 本试验研究的目的意义 | 第19-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-29页 |
| 2.1 试验材料 | 第20-22页 |
| 2.1.1 试验动物 | 第20页 |
| 2.1.2 试剂及试验仪器 | 第20-22页 |
| 2.2 试验方法及步骤 | 第22-29页 |
| 2.2.1 猪精液采集 | 第22页 |
| 2.2.2 试验设计 | 第22页 |
| 2.2.3 精液冷冻处理 | 第22-23页 |
| 2.2.4 Total RNA的提取 | 第23-24页 |
| 2.2.5 Total RNA质检 | 第24页 |
| 2.2.6 采用实时荧光定量(qRT-PCR)技术检测相关凋亡基因表达 | 第24-27页 |
| 2.2.7 Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9/6蛋白酶活性检测 | 第27-28页 |
| 2.2.8 Annexin Ⅴ-FITC染色 | 第28-29页 |
| 2.2.9 数据统计与分析 | 第29页 |
| 3 结果与分析 | 第29-37页 |
| 3.1 Total RNA质量检测结果 | 第29页 |
| 3.2 解冻后精子的活率和活力 | 第29-30页 |
| 3.3 目的基因qRT-PCR扩增有效性验证 | 第30页 |
| 3.4 凋亡相关基因qRT-PCR结果 | 第30-33页 |
| 3.5 Caspase蛋白酶活性检测 | 第33-34页 |
| 3.6 Annexin Ⅴ-FITC染色 | 第34-36页 |
| 3.7 检测结果的相关性分析 | 第36-37页 |
| 4 讨论 | 第37-43页 |
| 4.1 甘油对猪精子解冻后活力和活率的影响 | 第37页 |
| 4.2 甘油猪冷冻精子凋亡相关基因表达的影响 | 第37-41页 |
| 4.3 甘油对猪冷冻精子Caspase蛋白酶活性的影响 | 第41页 |
| 4.4 甘油对猪冷冻精子磷脂酰丝氨酸外翻的影响 | 第41-43页 |
| 5 结论 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-52页 |
| 致谢 | 第52-53页 |
| 攻读硕士学位期间发表论文 | 第53页 |
