| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 前言 | 第12-26页 |
| 1.1 多肽类药物研究现状 | 第12-13页 |
| 1.2 大环肽 | 第13-23页 |
| 1.2.1 大环肽发现 | 第13-14页 |
| 1.2.2 大环肽分布 | 第14-15页 |
| 1.2.3 大环肽分类 | 第15-16页 |
| 1.2.4 大环肽的生物合成 | 第16-17页 |
| 1.2.5 大环肽药理活性及机制 | 第17-21页 |
| 1.2.6 大环肽应用 | 第21-23页 |
| 1.2.7 总结 | 第23页 |
| 1.3 课题内容 | 第23-26页 |
| 1.3.1 研究背景 | 第23页 |
| 1.3.2 技术路线与研究内容 | 第23-26页 |
| 第一章 可溶性大环肽 241b获得与纯化工艺 | 第26-46页 |
| 1.1 材料 | 第26-30页 |
| 1.1.1 菌株、质粒及主要试剂 | 第26-27页 |
| 1.1.2 仪器设备 | 第27-28页 |
| 1.1.3 常用溶液的配制方法 | 第28-30页 |
| 1.2 实验方法 | 第30-35页 |
| 1.2.1 可溶性大环肽获得 | 第30-31页 |
| 1.2.2 从包涵体中释放大环肽 | 第31-35页 |
| 1.3 结果与分析 | 第35-44页 |
| 1.3.1 获得可溶性大环肽 | 第35-36页 |
| 1.3.2 重组大环肽融合蛋白包涵体的洗涤和溶解 | 第36-38页 |
| 1.3.3 超声处理、不同透析方式对大环肽释放产量的影响 | 第38-39页 |
| 1.3.4 不同温度对大环肽释放产量的影响 | 第39-40页 |
| 1.3.5 不同复性液对大环肽产量的影响 | 第40-41页 |
| 1.3.6 不同条件大环 241b肽脱盐处理的影响 | 第41-42页 |
| 1.3.7 经RP-HPLC获得大环肽 241b | 第42-44页 |
| 1.4 本章小结 | 第44-46页 |
| 第二章 大环肽 241b生物活性功能检测 | 第46-59页 |
| 2.1 材料 | 第46-48页 |
| 2.1.1 菌株、细胞株、线虫株 | 第46页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第46-47页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第47页 |
| 2.1.4 主要溶液配制 | 第47-48页 |
| 2.2 实验方法 | 第48-51页 |
| 2.2.1 抑菌试验 | 第48-49页 |
| 2.2.2 -CCK-8 试剂盒检测细胞活性 | 第49-50页 |
| 2.2.3 线虫实验 | 第50页 |
| 2.2.4 数据统计与处理 | 第50-51页 |
| 2.3 结果与分析 | 第51-58页 |
| 2.3.1 不同稀释浓度对菌液生长状况的影响 | 第51-52页 |
| 2.3.2 大环肽 241b对不同菌液MIC测定 | 第52-53页 |
| 2.3.3 大环肽 241b与CdCl2分别对MCF-7 细胞增殖的影响 | 第53-54页 |
| 2.3.4 大环肽 241b与CdCl2相互作用对MCF-7 细胞的影响 | 第54-56页 |
| 2.3.5 -241b对秀丽隐杆线虫生长的影响 | 第56-58页 |
| 2.4 本章小结 | 第58-59页 |
| 第三章 两种不同发酵方式比较 | 第59-66页 |
| 3.1 材料 | 第59页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第59页 |
| 3.1.2 主要仪器 | 第59页 |
| 3.2 实验方法 | 第59-61页 |
| 3.2.1 种子液的制备 | 第59-60页 |
| 3.2.2-两种发酵方式菌液生长情况 | 第60页 |
| 3.2.3 不同培养基对两种发酵方式的影响 | 第60页 |
| 3.2.4-两种发酵方式对蛋白诱导表达情况的影响 | 第60页 |
| 3.2.5 几丁质亲和与大环肽还原性剪接效果比较 | 第60-61页 |
| 3.3 结果与分析 | 第61-65页 |
| 3.3.1-发酵方式对发酵过程的影响 | 第61-63页 |
| 3.3.2 不同发酵方式对目的蛋白表达的影响 | 第63-65页 |
| 3.4 本章小结 | 第65-66页 |
| 第四章 发酵质量控制 | 第66-77页 |
| 4.1 材料 | 第66-67页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第66页 |
| 4.1.2 实验仪器 | 第66-67页 |
| 4.2 方法 | 第67-70页 |
| 4.2.1 对保存菌种的检测 | 第67页 |
| 4.2.2 污染菌的 16S rDNA测序鉴定 | 第67-69页 |
| 4.2.3 革兰氏染色实验验证污染杂菌 | 第69页 |
| 4.2.4 食物清除率实验 | 第69页 |
| 4.2.5 -Body bends实验 | 第69页 |
| 4.2.6 寿命试验 | 第69-70页 |
| 4.2.7 数据统计与处理 | 第70页 |
| 4.3 结果与分析 | 第70-76页 |
| 4.3.1 菌种鉴定结果 | 第70-72页 |
| 4.3.2 基于秀丽隐杆线虫判断粘质沙雷氏菌对 241b功能影响 | 第72-76页 |
| 4.4 本章小结 | 第76-77页 |
| 第五章 总结与展望 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-90页 |
| 致谢 | 第90-91页 |
| 科研成果 | 第91-92页 |
| 附录一 中英文缩略词对照 | 第92-93页 |
| 附录二 MOLDI-TOF-MS相关数据 | 第93-94页 |
| 附录三 16S rDNA测序结果 | 第94页 |
