| 中文摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 符号说明 | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-22页 |
| 1 乳腺生物反应器概述 | 第10-12页 |
| 1.1 乳腺生物反应器概念 | 第10-11页 |
| 1.2 国内外乳腺生物反应器的发展简史 | 第11-12页 |
| 1.3 乳腺生物反应器的动物种类选择 | 第12页 |
| 2 人组织纤溶酶原激活剂( t-PA)的概述 | 第12-16页 |
| 2.1 人组织纤溶酶原激活剂的结构与功能 | 第12-14页 |
| 2.2 人组织纤溶酶原激活剂的发展史 | 第14-15页 |
| 2.3 重组型人组织纤溶酶原激活剂的研究 | 第15-16页 |
| 3 溶血栓药物的研究进展 | 第16-17页 |
| 3.1 溶栓机理 | 第16页 |
| 3.2 溶栓药物的发展史 | 第16-17页 |
| 4 体细胞核移植制备转基因动物及检测 | 第17-18页 |
| 4.1 体细胞核移植制备转基因动物 | 第17页 |
| 4.2 转基因动物的鉴定及产物分析 | 第17-18页 |
| 4.2.1 整合检测 | 第17页 |
| 4.2.2 表达产物分析 | 第17-18页 |
| 5 乳蛋白分离纯化研究进展 | 第18-22页 |
| 5.1 乳中分离重组蛋白的特点 | 第18-19页 |
| 5.2 亲和层析分离纯化技术 | 第19页 |
| 5.3 t-PA及重组蛋白的分离纯化 | 第19-22页 |
| 第二章 体细胞核移植制备rhPA转基因山羊 | 第22-38页 |
| 1 材料 | 第22-24页 |
| 1.1 试验动物 | 第22页 |
| 1.2 rhPA乳腺特性表达载体 | 第22页 |
| 1.3 主要器械与设备 | 第22-23页 |
| 1.4 主要试剂及配制 | 第23-24页 |
| 2 方法 | 第24-34页 |
| 2.1 山羊胎儿成纤维细胞的分离和培养 | 第24-26页 |
| 2.1.1 原代山羊胎儿成纤维细胞的准备 | 第24-25页 |
| 2.1.2 胎儿性别鉴定 | 第25页 |
| 2.1.3 山羊胎儿成纤维细胞的冻存与复苏 | 第25-26页 |
| 2.2 外源基因rhPA电转染山羊胎儿成纤维细胞及筛选 | 第26-29页 |
| 2.2.1 BLC14/rhPA乳腺特异性表达载体的构建 | 第26页 |
| 2.2.2 常规分子生物学的操作方法 | 第26页 |
| 2.2.3 转染基因片段的准备 | 第26-28页 |
| 2.2.4 电击转染 | 第28页 |
| 2.2.5 细胞G418抗性筛选 | 第28页 |
| 2.2.6 挑取单克隆 | 第28页 |
| 2.2.7 细胞株的PCR整合检测 | 第28-29页 |
| 2.3 体细胞核移植制备rhPA转基因山羊 | 第29-32页 |
| 2.3.1 供核细胞准备 | 第29页 |
| 2.3.2 超数排卵与同期发情 | 第29-30页 |
| 2.3.3 卵母细胞的收集 | 第30-31页 |
| 2.3.4 去核和核移植 | 第31页 |
| 2.3.5 融合和激活 | 第31-32页 |
| 2.3.6 胚胎移植及妊娠检查 | 第32页 |
| 2.4 rhPA转基因山羊出生与整合表达检测 | 第32-33页 |
| 2.4.1 受体羊妊娠检查和生产护理 | 第32页 |
| 2.4.2 待测样品基因组DNA提取 | 第32-33页 |
| 2.4.3 PCR整合检测与产物测序 | 第33页 |
| 2.5 转基因山羊繁殖与后代检测 | 第33-34页 |
| 3 结果 | 第34-38页 |
| 3.1 胎儿成纤维的培养及性别鉴定 | 第34页 |
| 3.2 单克隆细胞株的获得 | 第34-36页 |
| 3.3 卵母细胞收集及胚胎移植 | 第36页 |
| 3.4 rhPA转基因山羊出生情况及PCR检测 | 第36页 |
| 3.5 转基因山羊的后代检测 | 第36-38页 |
| 第三章 BCL14/rhPA转基因山羊的乳腺特异性表达rhPA产物分析 | 第38-51页 |
| 1 材料 | 第38-40页 |
| 1.1 rhPA乳样 | 第38页 |
| 1.2 主要器材和仪器 | 第38页 |
| 1.3 主要试剂与配制 | 第38-40页 |
| 2 方法 | 第40-44页 |
| 2.1 转基因山羊乳汁的收集及处理 | 第40-41页 |
| 2.2 ELISA检测乳汁中rhPA的表达 | 第41页 |
| 2.3 转基因山羊乳清SDS-PAGE检测 | 第41-42页 |
| 2.4 转基因山羊乳清的Western Blot分析 | 第42页 |
| 2.5 纤维蛋白平板溶圈法(FAPA)检测rhPA生物活性 | 第42页 |
| 2.6 转基因山羊乳纯化 | 第42-44页 |
| 2.6.1 乳清提取及酸碱沉淀 | 第42-43页 |
| 2.6.2 rhPA转基因山羊乳清超滤 | 第43页 |
| 2.6.3 L-赖氨酸亲和层析纯化乳清 | 第43-44页 |
| 2.6.4 洗脱液浓缩 | 第44页 |
| 3. 结果 | 第44-51页 |
| 3.1 转基因山羊乳清的ELISA检测 | 第44-46页 |
| 3.2 转基因山羊乳清的SDS-PAGE电泳和Western Blot检测结果 | 第46-47页 |
| 3.3 FAPA溶栓检测活性 | 第47-48页 |
| 3.4 赖氨酸亲和层析洗脱结果 | 第48-51页 |
| 讨论 | 第51-53页 |
| 全文总结 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-61页 |
| 附录 | 第61-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
