| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 缩略表 | 第9-11页 |
| 目录 | 第11-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-24页 |
| 1.1 FUBPs简介 | 第14-16页 |
| 1.1.1 FUBPs结构 | 第14页 |
| 1.1.2 FUBPs家族成员及其在人与小鼠中的区别 | 第14-16页 |
| 1.1.2.1 FUBP1 | 第14-15页 |
| 1.1.2.2 FUBP2 | 第15页 |
| 1.1.2.3 FUBP3 | 第15-16页 |
| 1.2 C-MYC简介 | 第16页 |
| 1.3 FUBPs与C-MYC的作用机理 | 第16页 |
| 1.4 FUBP1的研究进展 | 第16-21页 |
| 1.4.1 FUBP1与病毒 | 第16-17页 |
| 1.4.2 FUBP1与肿瘤 | 第17-19页 |
| 1.4.3 FUBP1与帕金森综合症 | 第19-20页 |
| 1.4.4 FUBP1与细胞凋亡 | 第20页 |
| 1.4.5 FUBP1与其他调控因子 | 第20-21页 |
| 1.5 造血系统 | 第21页 |
| 1.6 MEL细胞株 | 第21页 |
| 1.7 诱导分化 | 第21-22页 |
| 1.8 FUBP1的来源 | 第22页 |
| 1.9 主要研究内容 | 第22-23页 |
| 1.10 技术路线 | 第23页 |
| 1.11 研究目的和意义 | 第23-24页 |
| 第二章 材料与方法 | 第24-47页 |
| 2.1 实验材料、试剂和仪器 | 第24-30页 |
| 2.1.1 细胞、菌株和质粒 | 第24页 |
| 2.1.2 临床样品 | 第24页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第24-26页 |
| 2.1.4 主要仪器与耗材 | 第26-27页 |
| 2.1.5 主要试剂配方 | 第27-30页 |
| 2.2 实验方法 | 第30-47页 |
| 2.2.1 细胞培养 | 第30页 |
| 2.2.2 蛋白样品的制备 | 第30-31页 |
| 2.2.3 蛋白质定量 | 第31页 |
| 2.2.4 Western blot实验 | 第31-33页 |
| 2.2.5 小鼠组织样品Western blot实验 | 第33页 |
| 2.2.5.1 小鼠组织提取 | 第33页 |
| 2.2.5.2 组织样品蛋白制备 | 第33页 |
| 2.2.5.3 组织样品蛋白定量 | 第33页 |
| 2.2.5.4 组织样品Western blot实验 | 第33页 |
| 2.2.6 小鼠胎肝样品Western blot实验 | 第33-34页 |
| 2.2.6.1 小鼠胎肝提取 | 第33-34页 |
| 2.2.6.2 胎肝蛋白样品制备 | 第34页 |
| 2.2.6.3 胎肝样品蛋白定量 | 第34页 |
| 2.2.6.4 胎肝样品Western blot实验 | 第34页 |
| 2.2.7 诱导分化样品Western blot实验 | 第34-35页 |
| 2.2.7.1 MEL的诱导分化 | 第34-35页 |
| 2.2.7.2 诱导分化细胞蛋白样品的制备 | 第35页 |
| 2.2.7.3 诱导分化蛋白样品定量 | 第35页 |
| 2.2.7.4 诱导分化样品Western blot实验 | 第35页 |
| 2.2.8 正常人和白血病人全血样品的Western blot实验 | 第35-36页 |
| 2.2.8.1 正常人和白血病人全血提取 | 第35页 |
| 2.2.8.2 蛋白样品定量 | 第35页 |
| 2.2.8.3 Western blot实验 | 第35-36页 |
| 2.2.9 半定量PCR实验 | 第36-38页 |
| 2.2.9.1 半定量PCR引物的设计 | 第36页 |
| 2.2.9.2 细胞总RNA提取 | 第36-37页 |
| 2.2.9.3 RNA反转录实验 | 第37-38页 |
| 2.2.9.4 反转录产物的PCR实验 | 第38页 |
| 2.2.10 短发卡RNA干扰实验 | 第38-45页 |
| 2.2.10.1 短发卡干扰引物的设计 | 第38-39页 |
| 2.2.10.2 干扰引物的退火 | 第39页 |
| 2.2.10.3 pLKO.1-TRC克隆载体的双酶切 | 第39-40页 |
| 2.2.10.4 pLKO.1-TRC克隆载体和干扰引物的连接 | 第40-41页 |
| 2.2.10.5 重组载体的转化 | 第41-42页 |
| 2.2.10.6 阳性克隆的测序鉴定 | 第42页 |
| 2.2.10.7 慢病毒的包装 | 第42-44页 |
| 2.2.10.8 干扰稳定株的筛选 | 第44-45页 |
| 2.2.10.9 干扰稳定株的验证 | 第45页 |
| 2.2.11 干扰稳定株的MTT实验 | 第45页 |
| 2.2.12 干扰稳定株的诱导分化和Western blot实验 | 第45-46页 |
| 2.2.12.1 干扰稳定株的诱导分化实验 | 第45页 |
| 2.2.12.2 干扰稳定株诱导分化样品的Western blot实验 | 第45-46页 |
| 2.2.13 MEL细胞免疫化学实验 | 第46-47页 |
| 第三章 实验结果 | 第47-56页 |
| 3.1 FUBP1在小鼠胎肝中的表达差异 | 第47页 |
| 3.2 FUBP1在小鼠不同组织中的表达谱 | 第47页 |
| 3.3 FUBP1在小鼠正常造血组织和白血病细胞中的表达差异 | 第47-48页 |
| 3.4 FUBP1在小鼠MEL细胞中的亚细胞定位 | 第48-49页 |
| 3.5 FUBP1在丁酸钠和六甲基双乙酰胺诱导的MEL细胞中的表达差异 | 第49-51页 |
| 3.5.1 丁酸钠诱导MEL的联苯胺染色结果 | 第49页 |
| 3.5.2 六甲基双乙酰胺诱导MEL的联苯胺染色结果 | 第49-50页 |
| 3.5.3 丁酸钠和六甲基双乙酰胺诱导的MEL中FUBP1的表达 | 第50-51页 |
| 3.6 半定量PCR检测SB诱导分化过程中FUBP1的表达 | 第51-52页 |
| 3.6.1 丁酸钠诱导的MEL不同时间点提取的RNA | 第51页 |
| 3.6.2 SB诱导分化过程的半定量PCR结果 | 第51-52页 |
| 3.7 短发卡RNA干扰FUBP1表达 | 第52-53页 |
| 3.7.1 重组载体测序 | 第52-53页 |
| 3.7.2 MEL干扰结果 | 第53页 |
| 3.8 MEL干扰稳定株的细胞活力 | 第53-54页 |
| 3.9 丁酸钠诱导MEL干扰稳定株的联苯胺染色 | 第54页 |
| 3.10 短发卡RNA干扰C-MYC的表达 | 第54-55页 |
| 3.11 FUBP1的临床应用 | 第55-56页 |
| 第四章 讨论 | 第56-59页 |
| 第五章 结论与展望 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-63页 |
| 致谢 | 第63页 |
