| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 缩略表 | 第8-9页 |
| 目录 | 第9-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-23页 |
| 1 红系细胞分化 | 第12页 |
| 2 小鼠红白血病(MEL)细胞系 | 第12-13页 |
| 3 丁酸钠 | 第13页 |
| 4 红系相关蛋白简介 | 第13-14页 |
| 5 NonO蛋白的简介 | 第14-21页 |
| 5.1 NonO蛋白的结构和定位 | 第14-15页 |
| 5.2 NonO蛋白的功能 | 第15-20页 |
| 5.2.1 NonO蛋白与肿瘤等疾病的关系 | 第15-17页 |
| 5.2.2 NonO蛋白参与多种基因转录调控 | 第17-19页 |
| 5.2.3 NonO蛋白参与DNA损伤修复和DNA解旋 | 第19页 |
| 5.2.4 NonO参与pre-mRNA的剪接和RNA核滞留 | 第19-20页 |
| 5.2.5 NonO的其他功能 | 第20页 |
| 5.3 NonO与白血病 | 第20-21页 |
| 6 研究内容 | 第21-22页 |
| 7 技术路线 | 第22-23页 |
| 第二章 材料和方法 | 第23-35页 |
| 1 材料、仪器和试剂 | 第23-25页 |
| 1.1 实验材料 | 第23页 |
| 1.2 实验仪器 | 第23-24页 |
| 1.3 实验试剂 | 第24页 |
| 1.4 试剂配制 | 第24-25页 |
| 2 实验方法 | 第25-35页 |
| 2.1 细胞培养和丁酸钠诱导分化 | 第25页 |
| 2.2 联苯胺染色 | 第25页 |
| 2.3 瑞氏染色检测细胞分化 | 第25页 |
| 2.4 MTT检测丁酸钠对MEL细胞的活力的影响 | 第25页 |
| 2.5 Western blot检测NonO在丁酸钠处理MEL细胞不同时间点的表达量 | 第25-27页 |
| 2.5.1 样品制备 | 第25-26页 |
| 2.5.2 Bradford法蛋白定量 | 第26页 |
| 2.5.3 Western blot实验 | 第26-27页 |
| 2.6 免疫细胞化学检测NonO的表达量变化以及NonO与PU.1的定位情况 | 第27页 |
| 2.6.1 样品制备 | 第27页 |
| 2.6.2 共聚焦显微实验 | 第27页 |
| 2.7 半定量PCR检测相关基因在RNA水平上的表达变化情况 | 第27-30页 |
| 2.7.1 Trizol法抽提MEL细胞的总RNA | 第27-28页 |
| 2.7.2 反转录试剂盒(TOYOBO)合成cDNA | 第28-29页 |
| 2.7.3 半定量PCR检测相关基因在RNA水平上的表达变化 | 第29-30页 |
| 2.8 MEL高表达NonO的稳定株的构建 | 第30-34页 |
| 2.8.1 PCR扩增NonO基因 | 第30-31页 |
| 2.8.2 SDS碱裂解法少量制备大肠杆菌Stbl3质粒DNA | 第31页 |
| 2.8.3 Nhe I和EcoR I双酶切 | 第31-32页 |
| 2.8.4 连接 | 第32页 |
| 2.8.5 制备Stbl3感受态 | 第32-33页 |
| 2.8.6 转化实验 | 第33页 |
| 2.8.7 鉴定 | 第33-34页 |
| 2.9 病毒包装和稳定表达NonO的细胞株的构建 | 第34-35页 |
| 第三章 实验结果 | 第35-47页 |
| 1 NonO在小鼠胎肝11.5～15.5day表达变化 | 第35页 |
| 2 丁酸钠诱导MEL细胞向红系分化,抑制细胞增殖 | 第35-36页 |
| 3 Western blot检测NonO在丁酸钠诱导MEL细胞分化过程中的表达量变化 | 第36-37页 |
| 4 免疫细胞化学检测NonO的表达量变化 | 第37-39页 |
| 5 免疫细胞化学检NonO在MEL细胞中的的定位情况 | 第39页 |
| 6 半定量PCR检测相关基因在RNA水平上的表达变化情况 | 第39-40页 |
| 7 NonO与红系分调控因子PU.1共定位 | 第40-41页 |
| 7.1 PU.1在丁酸钠诱导MEL细胞分化过程中表达下调 | 第40页 |
| 7.2 NonO与PU.1共定位 | 第40-41页 |
| 8 MEL高表达NonO的稳定株的构建 | 第41-44页 |
| 8.1 pLJM1-NonO高表达载体的构建 | 第41-42页 |
| 8.2 慢病毒包装和稳定表达NonO的细胞株的筛选 | 第42-43页 |
| 8.3 稳定高表达NonO的细胞株MEL-NonO的筛选 | 第43-44页 |
| 9 NonO高表达抑制了MEL细胞的增殖活力 | 第44页 |
| 10 NonO高表达促进丁酸钠诱导MEL细胞向红系分化 | 第44-46页 |
| 11 NonO高表达对红系分化正调控因子GATAl的影响 | 第46-47页 |
| 第四章 讨论 | 第47-49页 |
| 第五章 结论和展望 | 第49-50页 |
| 1 结论 | 第49页 |
| 2 展望 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-54页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第54-55页 |
| 致谢 | 第55页 |
