| 第一章 前 言 | 第9-35页 |
| 1 基因治疗 | 第9-25页 |
| 1.1 基因治疗概论 | 第9-10页 |
| 1.2 基因治疗的策略 | 第10-12页 |
| 1.3 基因治疗的途径 | 第12页 |
| 1.4 基因治疗的基本程序 | 第12-16页 |
| 1.5 基因治疗的靶向 | 第16-17页 |
| 1.6 非病毒基因治疗的研究进展 | 第17-21页 |
| 1.7 基因治疗中有待解决的关键性问题 | 第21-24页 |
| 1.8 基因治疗的前景与展望 | 第24-25页 |
| 2 组蛋白 | 第25-32页 |
| 2.1 组蛋白在基因调控中的作用 | 第25-26页 |
| 2.2 组蛋白的修饰 | 第26-27页 |
| 2.3 组蛋白与染色质的结合 | 第27-28页 |
| 2.4 古菌组蛋白 | 第28-32页 |
| 3 立论依据 | 第32-35页 |
| 第二章 HPhA 工程菌的构建及表达 | 第35-67页 |
| 1 序言 | 第35-36页 |
| 2 仪器与材料 | 第36-38页 |
| 2.1 主要仪器 | 第36页 |
| 2.2 实验材料 | 第36-37页 |
| 2.3 溶液配制 | 第37-38页 |
| 3 实验方法 | 第38-44页 |
| 3.1 HPhA 基因的钓取 | 第38-39页 |
| 3.2 PCR 产物的酶切和纯化 | 第39页 |
| 3.3 质粒载体的限制性酶切、纯化及磷酸化处理 | 第39页 |
| 3.4 目的基因与载体的连接 | 第39-40页 |
| 3.5 重组质粒的转化 | 第40页 |
| 3.6 单克隆菌株的筛选和鉴定 | 第40-41页 |
| 3.7 工程菌的复壮及初步放大 | 第41页 |
| 3.8 工程菌生长曲线 | 第41页 |
| 3.9 重组蛋白 HPhA 的诱导表达 | 第41页 |
| 3.10 重组蛋白突变体工程菌的构建 | 第41-43页 |
| 3.11 重组蛋白突变体工程菌的表达及检测 | 第43页 |
| 3.12 蛋白质的聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第43-44页 |
| 4 结果与讨论 | 第44-65页 |
| 4.1 古菌组蛋白同源序列比较分析 | 第44-47页 |
| 4.2 超嗜热古菌组蛋白 HPhA 基因的克隆、酶切及回收 | 第47-48页 |
| 4.3 表达载体 pET11a 的酶切、回收及去磷酸化处理 | 第48-49页 |
| 4.4 古菌蛋白目的基因与 pET11a 的连接、转化及鉴定 | 第49-53页 |
| 4.5 工程菌生长曲线的绘制 | 第53页 |
| 4.6 HPhA 表达宿主菌的选择 | 第53-56页 |
| 4.7 HPhA 的诱导表达 | 第56-58页 |
| 4.8 古菌组蛋白 HPhA 突变基因的获得 | 第58-61页 |
| 4.9 重组 T 载体构建及鉴定 | 第61-63页 |
| 4.10 古菌组蛋白 HPhA 突变体表达质粒的构建 | 第63-65页 |
| 4.11 古菌组蛋白 HPhA 突变体表达菌株的构建及表达 | 第65页 |
| 5 小结 | 第65-67页 |
| 第三章 HPhA 的分离、纯化及性质研究 | 第67-84页 |
| 1 序言 | 第67-68页 |
| 2 仪器与材料 | 第68-69页 |
| 2.1 主要仪器 | 第68页 |
| 2.2 实验材料 | 第68页 |
| 2.3 溶液配制 | 第68-69页 |
| 3 实验方法 | 第69-73页 |
| 3.1 HPhA 的分离纯化 | 第69-70页 |
| 3.2 Lorry 法检测蛋白含量 | 第70-71页 |
| 3.3 重组蛋白 HPhA 纯度检测及分子量的确定 | 第71-72页 |
| 3.4 重组蛋白 HPhA 等电点的测定 | 第72页 |
| 3.5 重组蛋白 HPhA 的氨基酸组成分析 | 第72页 |
| 3.6 重组蛋白 HPhA 的园二色谱分析 | 第72-73页 |
| 4 结果与讨论 | 第73-82页 |
| 4.1 重组蛋白 HPhA 的纯化 | 第73-75页 |
| 4.2 HPhA 蛋白含量的确定 | 第75-76页 |
| 4.3 HPhA 的纯化效率 | 第76页 |
| 4.4 Tricine-SDS-PAGE | 第76-78页 |
| 4.5 高效液相色谱分析 | 第78-79页 |
| 4.6 重组蛋白 HPhA 分子量测定 | 第79页 |
| 4.7 重组蛋白 HPhA 的氨基酸组成分析 | 第79-80页 |
| 4.8 HPhA 等电点的测定 | 第80-81页 |
| 4.9 重组蛋白 HPhA 的园二色谱分析 | 第81-82页 |
| 5 小结 | 第82-84页 |
| 第四章 HPhA 与 DNA 相互作用的研究 | 第84-101页 |
| 1 序言 | 第84-85页 |
| 2 实验材料 | 第85-86页 |
| 2.1 菌株和质粒 | 第85页 |
| 2.2 主要试剂 | 第85-86页 |
| 3 实验方法 | 第86-87页 |
| 3.1 质粒 pET21a 的制备及纯化 | 第86页 |
| 3.2 重组蛋白 HPhA 对质粒 DNA Tm值的影响 | 第86页 |
| 3.3 重组蛋白 HPhA 与质粒 DNA 结合实验分析 | 第86-87页 |
| 3.4 HPhA 增强质粒 DNA 抗核酸酶降解的研究 | 第87页 |
| 4 结果与讨论 | 第87-100页 |
| 4.1 质粒 pET21a 的制备及纯化 | 第87页 |
| 4.2 重组蛋白 HPhA 对质粒 DNA Tm值的影响 | 第87-88页 |
| 4.3 HPhA 与质粒 DNA 不同质量比对结合活性的影响 | 第88-90页 |
| 4.4 温度对 HPhA-DNA 结合的影响 | 第90-91页 |
| 4.5 盐离子浓度对 HPhA 与质粒 DNA 结合活性的影响 | 第91-92页 |
| 4.6 HPhA 增强质粒 DNA 抗核酸酶降解的研究 | 第92-94页 |
| 4.7 古菌组蛋白 HPhA 结构分析 | 第94-96页 |
| 4.8 古菌组蛋白 HPhA 耐热机制的探讨 | 第96-100页 |
| 5 小结 | 第100-101页 |
| 第五章 HPhA 介导基因转染的研究 | 第101-135页 |
| 1 序言 | 第101-102页 |
| 2 仪器与材料 | 第102-104页 |
| 2.1 主要仪器 | 第102页 |
| 2.2 实验材料 | 第102-103页 |
| 2.3 溶液配制 | 第103-104页 |
| 3 实验方法 | 第104-112页 |
| 3.1 质粒 pCMV β-gal 的制备 | 第104页 |
| 3.2 质粒 DNA-HPhA 复合物的制备 | 第104页 |
| 3.3 凝胶延迟分析 | 第104页 |
| 3.4 质粒降解分析 | 第104-105页 |
| 3.5 细胞的培养 | 第105页 |
| 3.6 细胞转染 | 第105页 |
| 3.7 MTT 法检测重组蛋白 HPhA 对细胞的毒性 | 第105-106页 |
| 3.8 染色体基因组的获得 | 第106-107页 |
| 3.9 HBsAg 基因的扩增 | 第107页 |
| 3.10 克隆载体的构建 | 第107-109页 |
| 3.11 表达载体的构建 | 第109页 |
| 3.12 质粒的大量提取及纯化 | 第109-111页 |
| 3.13 重组蛋白 HPhA 介导的瞬时表达 | 第111页 |
| 3.14 HBsAg 瞬时表达的检测 | 第111页 |
| 3.15 重组蛋白 HPhA 介导的乙肝核酸疫苗小鼠免疫实验 | 第111-112页 |
| 4 结果与讨论 | 第112-134页 |
| 4.1 质粒 pCMV β-gal 的制备 | 第112-113页 |
| 4.2 HPhA 的制备 | 第113-114页 |
| 4.3 凝胶延迟分析 | 第114页 |
| 4.4 质粒降解分析 | 第114-116页 |
| 4.5 HPhA 与质粒不同的质量比对转染效率的影响 | 第116-117页 |
| 4.6 细胞汇合度对转染效率的影响 | 第117-118页 |
| 4.7 保温时间对转染效率的影响 | 第118-119页 |
| 4.8 钙离子对转染效率的影响 | 第119-122页 |
| 4.9 不同浓度的血清对转染效率的影响 | 第122-123页 |
| 4.10 不同细胞株转染效率的比较 | 第123-124页 |
| 4.11 HPhA 对 Lipofectemine 介导细胞转染效率的影响 | 第124页 |
| 4.12 HPhA 对细胞的毒性分析 | 第124-127页 |
| 4.13 乙肝病毒表面抗原核酸疫苗的构建 | 第127-130页 |
| 4.14 质粒的大量提取和纯化 | 第130-131页 |
| 4.15 重组 HPhA 介导核酸疫苗在 COS 7 细胞中瞬时表达 | 第131-132页 |
| 4.16 重组蛋白 HPhA 介导乙肝核酸疫苗小鼠免疫 | 第132-134页 |
| 5 小结 | 第134-135页 |
| 结 论 | 第135-136页 |
| 参考文献 | 第136-144页 |
| 作者简介 | 第144-146页 |
| 中文摘要 | 第146-150页 |
| 英文摘要 | 第150页 |
