| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 1 前言 | 第10-25页 |
| 1.1 新城疫病毒 | 第10页 |
| 1.2 核酸适配体概述 | 第10-21页 |
| 1.2.1 核酸适配体 | 第10-12页 |
| 1.2.2 SELEX技术的原理 | 第12-13页 |
| 1.2.3 SELEX技术的研究进展 | 第13-20页 |
| 1.2.4 次级文库的制备方法 | 第20-21页 |
| 1.3 核酸适配体在临床诊断和治疗中的应用 | 第21-24页 |
| 1.3.1 分子成像 | 第21-22页 |
| 1.3.2 流式细胞术 | 第22页 |
| 1.3.3 生物传感器 | 第22-23页 |
| 1.3.4 胶体金免疫层析法 | 第23页 |
| 1.3.5 临床治疗药物 | 第23-24页 |
| 1.4 课题的目的、意义和技术路线 | 第24-25页 |
| 2 SELEX技术筛选新城疫病毒HN蛋白核酸适配体 | 第25-37页 |
| 2.1 材料与仪器 | 第25-26页 |
| 2.1.1 主要试剂 | 第25页 |
| 2.1.2 主要溶液配制 | 第25-26页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-37页 |
| 2.2.1 病毒的增殖与纯化 | 第26-27页 |
| 2.2.2 HN蛋白及纯化病毒的鉴定 | 第27-30页 |
| 2.2.3 新城疫病毒核酸适配体的体外筛选 | 第30-33页 |
| 2.2.4 核酸适配体的克隆、鉴定和测序 | 第33-34页 |
| 2.2.5 ssDNA亚库亲和性测定 | 第34页 |
| 2.2.6 适配体亲和力和特异性分析 | 第34-35页 |
| 2.2.7 序列分析和二级结构预测 | 第35页 |
| 2.2.8 适配体生物学活性分析 | 第35-37页 |
| 3 结果 | 第37-50页 |
| 3.1 筛选靶标的鉴定 | 第37-38页 |
| 3.1.1 HN蛋白血凝活性测定结果 | 第37页 |
| 3.1.2 HN蛋白SDS-PAGE结果 | 第37页 |
| 3.1.3 HN蛋白Western blot结果 | 第37-38页 |
| 3.1.4 病毒纯化 | 第38页 |
| 3.2 PCR退火温度优化结果 | 第38-39页 |
| 3.3 制备dsDNA最佳循环数优化 | 第39-40页 |
| 3.4 不对称PCR条件优化 | 第40页 |
| 3.5 核酸适配体克隆PCR鉴定结果 | 第40-41页 |
| 3.6 各轮ssDNA文库亲和力测定 | 第41页 |
| 3.7 适配体的亲和力和特异性分析 | 第41-45页 |
| 3.7.1 ELISA条件优化 | 第41-42页 |
| 3.7.2 ELISA测定适配体亲和力 | 第42-43页 |
| 3.7.3 ELISA测定适配体特异性 | 第43-44页 |
| 3.7.4 Dot-blot分析适配体特异性和亲和力 | 第44-45页 |
| 3.8 序列分析 | 第45-49页 |
| 3.9 血凝抑制试验 | 第49-50页 |
| 3.10 噬斑试验 | 第50页 |
| 4 讨论与结论 | 第50-54页 |
| 4.1 讨论 | 第50-53页 |
| 4.2 结论 | 第53-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-61页 |
| 附录 | 第61页 |