| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 本论文常用缩写词 | 第7-12页 |
| 1 前言 | 第12-23页 |
| 1.1 猪细小病毒的概述 | 第12页 |
| 1.2 猪细小病毒流行病学 | 第12-13页 |
| 1.3 PPV的分子生物学特点 | 第13-15页 |
| 1.3.1 基因组结构与主要编码蛋白 | 第13-14页 |
| 1.3.2 PPV复制和转录特点 | 第14-15页 |
| 1.4 PPV病原学 | 第15-16页 |
| 1.4.1 PPV的理化特性 | 第15页 |
| 1.4.2 PPV的血凝性 | 第15页 |
| 1.4.3 PPV的致病性及临床表现型 | 第15-16页 |
| 1.5 PPV的诊断方法 | 第16-18页 |
| 1.5.1 PPV的分离培养 | 第16页 |
| 1.5.2 血清学方法 | 第16-18页 |
| 1.6 分子生物学方法 | 第18-19页 |
| 1.6.1 PCR检测技术 | 第18-19页 |
| 1.6.2 核酸探针技术 | 第19页 |
| 1.7 PPV疫苗概况 | 第19-22页 |
| 1.7.1 PPV灭活疫苗 | 第19-20页 |
| 1.7.2 PPV弱毒疫苗 | 第20-21页 |
| 1.7.3 其他新型疫苗 | 第21-22页 |
| 1.8 本论文研究的目的与意义 | 第22-23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-41页 |
| 2.1 材料 | 第23-25页 |
| 2.1.1 菌株、毒株和细胞 | 第23页 |
| 2.1.2 主要酶类及其它相关试剂 | 第23页 |
| 2.1.3 常用溶液的配制 | 第23-24页 |
| 2.1.4 细菌培养基配制 | 第24-25页 |
| 2.1.5 主要仪器及设备 | 第25页 |
| 2.1.6 实验动物 | 第25页 |
| 2.2 方法 | 第25-41页 |
| 2.2.1 PPV的分离与鉴定 | 第25-28页 |
| 2.2.2 PPVGD分离株基因组的扩增 | 第28-33页 |
| 2.2.3 各基因序列的拼接及分析 | 第33-35页 |
| 2.2.4 PPVGD分离株的培养 | 第35-38页 |
| 2.2.5 病毒无菌检验 | 第38页 |
| 2.2.6 PPVGD分离株的灭活 | 第38页 |
| 2.2.7 PPVGD灭活效果的检测 | 第38页 |
| 2.2.8 PPVGD分离株灭活疫苗的制备 | 第38-39页 |
| 2.2.9 PPVGD灭活疫苗的质量检测 | 第39页 |
| 2.2.10 PPVGD灭活疫苗免疫效果的评价 | 第39-41页 |
| 3 结果与分析 | 第41-54页 |
| 3.1 PPV的分离与鉴定 | 第41页 |
| 3.2 PPV分离培养及理化鉴定 | 第41-42页 |
| 3.2.1 PPVGD分离株细胞病变观察 | 第41-42页 |
| 3.2.2 PPVGD 分离株血凝效价的测定 | 第42页 |
| 3.3 PPVGD分离株的理化学性质鉴定 | 第42页 |
| 3.4 PPVGD分离株基因组各片段克隆 | 第42-49页 |
| 3.4.1 基因扩增 | 第42-43页 |
| 3.4.2 重组质粒的PCR鉴定 | 第43页 |
| 3.4.3 PPV分离株各基因测序结果及序列拼接 | 第43-44页 |
| 3.4.4 PPVGD分离株和参考毒株的NS1核苷酸和氨基酸同源性比较 | 第44-46页 |
| 3.4.5 PPVGD分离株和参考毒株的VP2核苷酸和氨基酸同源性比较 | 第46-49页 |
| 3.4.6 PPVGD株遗传进化关系分析 | 第49页 |
| 3.5 PPVGD分离株培养条件优化 | 第49-51页 |
| 3.5.1 细胞培养液NCS浓度的确定 | 第49-50页 |
| 3.5.2 维持液NCS浓度的确定 | 第50页 |
| 3.5.3 接毒时细胞密度的确定 | 第50页 |
| 3.5.4 细胞接毒剂量的确定 | 第50-51页 |
| 3.5.5 收毒时间确定 | 第51页 |
| 3.6 PPVGD灭活疫苗的制备 | 第51-52页 |
| 3.6.1 PPVGD分离株血凝效价的测定 | 第51页 |
| 3.6.2 PPVGD灭活效果的检测 | 第51页 |
| 3.6.3 PPVGD灭活疫苗质量的检测 | 第51-52页 |
| 3.7 PPVGD灭活疫苗免疫效果的评价 | 第52-54页 |
| 3.7.1 豚鼠-动物模型 | 第52-53页 |
| 3.7.2 猪-动物模型 | 第53-54页 |
| 4 讨论 | 第54-59页 |
| 4.1 PPV分离株基因组序列分析 | 第54-55页 |
| 4.2 PPVGD分离株的增殖培养 | 第55-56页 |
| 4.3 PPV滴度测定 | 第56-57页 |
| 4.4 PPVGD灭活疫苗的制备 | 第57-58页 |
| 4.5 抗体检测 | 第58-59页 |
| 全文总结 | 第59-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-65页 |
| 附录 | 第65-71页 |