| 摘要 | 第4-6页 |
| 英文摘要 | 第6-7页 |
| 第一部分 引言 | 第11-34页 |
| 一、氧化应激 | 第11-14页 |
| (一) 氧化应激的发现及特点 | 第11-12页 |
| (二) 氧化应激与疾病 | 第12-14页 |
| 二、抗氧化防御系统 | 第14-20页 |
| (一) 抗氧化防御系统的特点 | 第14-16页 |
| (二) 抗氧化防御系统相关的信号通路 | 第16-19页 |
| (三) 抗氧化防御系统的意义与应用 | 第19-20页 |
| 三、Nrf2蛋白及其翻译后修饰的研究进展 | 第20-26页 |
| (一) Nrf2蛋白的介绍和结构分析 | 第20-22页 |
| (二) Nrf2蛋白的功能 | 第22-24页 |
| (三) Nrf2蛋白的翻译后修饰 | 第24-26页 |
| 四、精氨酸甲基转移酶 | 第26-31页 |
| (一) 精氨酸甲基化修饰及精氨酸甲基转移酶家族简介 | 第26-28页 |
| (二) 精氨酸甲基转移酶PRMT1的功能 | 第28-31页 |
| 五、本论文研究的内容及意义 | 第31-34页 |
| (一) 立题依据 | 第31-32页 |
| (二) 研究内容及意义 | 第32-34页 |
| 第二部分 实验材料与方法 | 第34-56页 |
| 一、实验材料 | 第34-36页 |
| (一) 实验仪器 | 第34-35页 |
| (二) 试剂 | 第35页 |
| (三) 抗体 | 第35-36页 |
| (四) 细胞系 | 第36页 |
| 二、实验方法 | 第36-56页 |
| Ⅰ、分子生物学实验方法 | 第36-51页 |
| (一) 质粒构建 | 第36-38页 |
| (二) 质粒的大量提取 | 第38-39页 |
| (三) 细胞的总RNA的提取、逆转录和实时荧光定量PCR | 第39-40页 |
| (四) 免疫印迹(Western Blot) | 第40-43页 |
| (五) 蛋白免疫共沉淀(Co-IP) | 第43页 |
| (六) 原核蛋白纯化、GST-pull down实验 | 第43-45页 |
| (七) 体外甲基化实验 | 第45-46页 |
| (八) 质谱实验(mass spectrometry analysis) | 第46页 |
| (九) 染色质的免疫共沉淀实验(ChIP) | 第46-48页 |
| (十) 凝胶迁移实验(EMSA) | 第48-51页 |
| Ⅱ、细胞生物学实验方法 | 第51-56页 |
| (一) 细胞的培养 | 第51页 |
| (二) PEI瞬时转染 | 第51页 |
| (三) 慢病毒包装及慢病毒侵染细胞 | 第51-52页 |
| (四) 双荧光素酶报告基因检测 | 第52页 |
| (五) 细胞的活力检测实验(MTT) | 第52-53页 |
| (六) 总谷胱甘肽水平检测(Total GSH Levels) | 第53-54页 |
| (七) 免疫荧光 | 第54-56页 |
| 第三部分 实验结果与分析 | 第56-74页 |
| 一、Nrf2的精氨酸被PRMT1甲基化修饰 | 第56-59页 |
| (一) Nrf2在不同细胞系中的表达 | 第56页 |
| (二) Nrf2被PRMT1甲基化 | 第56-59页 |
| 二、Nrf2的第437位精氨酸(R437)位点被PRMT1甲基化 | 第59-62页 |
| (一) Nrf2的Neh1 domain被PRMT1甲基化 | 第59-60页 |
| (二) PRMT1甲基化Nrf2单一位点:第437位精氨酸 | 第60-62页 |
| 三、Nrf2被PRMT1甲基化增强其转录活性和DNA结合能力 | 第62-66页 |
| (一) 甲基化的Nrf2增强靶基因的表达 | 第62-63页 |
| (二) 甲基化的Nrf2增强其靶基因的转录 | 第63-64页 |
| (三) 甲基化的Nrf2与DNA的结合能力增强 | 第64-66页 |
| 四、甲基化的Nrf2促进p300的招募和靶基因启动子的乙酰化 | 第66-68页 |
| 五、PRMT1甲基化Nrf2增强其抗氧化能力 | 第68-74页 |
| (一) HepG2细胞抗氧化模型的建立 | 第68页 |
| (二) Nrf2的甲基化水平在细胞抗氧化过程中升高 | 第68-70页 |
| (三) Nrf2的甲基化修饰增强细胞的抗氧化能力 | 第70-74页 |
| 第四部分 讨论 | 第74-79页 |
| 一、Nrf2的翻译后修饰类型与PRMT1底物特异性 | 第74页 |
| 二、蛋白精氨酸甲基化与蛋白的功能 | 第74-75页 |
| 三、PRMT1、p300/CBP与Nrf2的关系 | 第75-77页 |
| 四、Nrf2精氨酸甲基化修饰的调控及意义 | 第77-79页 |
| 主要结论和创新点 | 第79-80页 |
| 一、主要结论 | 第79页 |
| 二、主要创新点 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-94页 |
| 附录 | 第94-97页 |
| 致谢 | 第97-98页 |
| 在学期间公开发表论文及著作情况 | 第98页 |
