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番茄SlAV2基因的克隆、表达和功能分析

中文摘要第1-13页
Abstract第13-16页
1 前言第16-26页
   ·MYB转录因子研究进展第16页
     ·MYB转录因子结构及分类第16页
     ·R2R3-MYB转录因子的生物学功能第16页
   ·植物花青素的功能及合成机制第16-21页
     ·花青素的功能第17-19页
       ·抗氧化第17页
       ·光保护第17-18页
       ·抗低温第18-19页
       ·抗高温第19页
       ·营养和药用价值第19页
     ·花青素合成途径第19-20页
     ·花青素合成的调控第20-21页
   ·植物ROS的产生及清除第21页
     ·植物ROS的产生第21页
     ·植物ROS清除机制第21页
   ·低温胁迫对植物的影响第21-22页
   ·高温胁迫对植物的影响第22-23页
   ·果实成熟的研究第23-24页
     ·果实的成熟类型第23页
     ·调控果实成熟的转录因子第23页
     ·乙烯对果实成熟的影响第23-24页
     ·细胞壁的降解和果实软化第24页
   ·本研究的目的意义第24-26页
2 材料与方法第26-49页
   ·实验材料第26-28页
     ·植物材料第26页
     ·材料的培养和处理第26页
     ·菌株与质粒第26页
     ·酶及生化试剂第26页
     ·PCR引物第26-28页
   ·实验方法第28-49页
     ·总RNA的提取第28页
     ·cDNA第一条链的合成第28-29页
     ·番茄SlAN2基因的克隆第29-30页
     ·真核表达载体的构建第30-37页
       ·正、反义表达载体的构建第30-31页
       ·连接第31页
       ·大肠杆菌感受态细胞的制备第31页
       ·转化及克隆筛选第31-32页
       ·提取质粒DNA(试剂盒)第32页
       ·重组质粒的酶切鉴定第32-33页
       ·回收目的片段(DNA回收试剂盒)第33页
       ·DNA序列测定第33-34页
       ·根癌农杆菌LBA4404感受态细胞的制备与转化第34页
       ·农杆菌介导转化番茄第34-36页
       ·农杆菌介导转化烟草第36-37页
     ·转基因植株的PCR鉴定第37-40页
       ·提取基因组DNA第37-38页
       ·转基因植株的PCR鉴定第38-39页
       ·qRT-PCR检测转基因番茄中SlAN2转录水平第39页
       ·花青素合成途径相关基因的qRT-PCR分析第39页
       ·果实成熟相关基因的qRT-PCR分析第39-40页
     ·D1蛋白的Western杂交第40-44页
       ·类囊体膜的制备第40页
       ·利用试管微量沉淀法测定抗血清效价第40-41页
       ·聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)第41页
       ·尿素-SDS-PAGE第41-42页
       ·半干法蛋白转移第42-43页
       ·免疫检测第43页
       ·显色反应第43-44页
     ·SlAN2蛋白的定位第44页
       ·构建pBI121-SlAN2-GFP表达载体第44页
       ·SlAN2蛋白亚细胞定位第44页
     ·生理指标的测定第44-49页
       ·花青素含量测定第45页
       ·H_2O_2的染色第45页
       ·O_2·~-的染色第45页
       ·H_2O_2定量检测第45页
       ·O_2·~-定量检测第45-46页
       ·净光合速率的测量第46页
       ·叶绿素荧光的测定第46页
       ·叶绿素含量测定第46页
       ·膜电解质外渗测定第46页
       ·DPPH法测定抗氧化能力第46-47页
       ·番茄果实硬度的测定第47页
       ·番茄果实色素的提取第47页
       ·番茄果实色素含量的测定第47-48页
       ·番茄红素等标准曲线的绘制第48页
       ·番茄果实中乙烯含量的测定第48页
       ·配制标准气体第48页
       ·样品乙烯测定第48-49页
3 结果与分析第49-78页
   ·SlAN2转录因子的分离及其特征第49-50页
     ·SlAN2转录因子全长cDNA序列的克隆第49-50页
     ·SlAN2基因的序列分析第50页
   ·SlAN2蛋白的亚细胞定位第50-52页
   ·SlAN2在番茄中的表达分析第52-53页
     ·SlAN2在番茄不同器官中的表达第52页
     ·SlAN2在不同逆境胁迫下的表达分析第52-53页
   ·正、反义表达载体的构建第53-55页
   ·SlAN2基因在烟草中的遗传转化第55-59页
     ·过表达SlAN2基因烟草的获得及表达分析第55-56页
     ·SlAN2基因过表达提高了转基因烟草的花青素含量第56页
     ·SlAN2基因过表达提高了烟草中花青素合成相关基因的表达水平第56-59页
   ·SlAN2基因过表达提高了烟草的耐冷性第59-62页
     ·低温胁迫下生长状况分析第59-60页
     ·SlAN2基因过表达减轻了低温胁迫下PSII的光抑制第60页
     ·SlAN2基因过表达提高了烟草低温胁迫下的光合速率第60-62页
   ·SlAN2基因过表达提高烟草抗氧化胁迫能力第62-64页
     ·SlAN2基因过表达减轻了MV处理对烟草叶片的光漂白作用第62-63页
     ·SlAN2过表达对氧化胁迫下烟草Fv/Fm的影响第63页
     ·SlAN2过表达对氧化胁迫下烟草膜稳定性的影响第63-64页
   ·SlAN2基因在番茄中的遗传转化第64-67页
     ·转SlAN2基因番茄的获得及PCR鉴定第64页
     ·SlAN2基因在转正义基因番茄中的表达分析第64-65页
     ·SlAN2基因过表达提高了转基因番茄的花青素含量第65页
     ·SlAN2基因过表达提高了花青素合成相关基因的表达水平第65-67页
   ·SlAN2基因过表达提高了转基因番茄的耐热性第67-71页
     ·高温胁迫下生长状况分析第67页
     ·SlAN2基因过表达减轻转基因番茄在高温下的膜损伤第67页
     ·SlAN2基因过表达减轻了高温胁迫下PSII的光抑制第67-69页
     ·SlAN2基因过表达提高了番茄高温胁迫下的光合速率第69页
     ·SlAN2基因过表达对高温胁迫下番茄D1蛋白的影响第69页
     ·SlAN2基因过表达对高温胁迫下番茄活性氧积累的影响第69-71页
     ·SlAN2基因过表达对高温胁迫下番茄抗氧化性能的影响第71页
   ·SlAN2基因过表达对番茄果实成熟的影响第71-78页
     ·SlAN2基因过表达在番茄果实成熟中具有重要作用第71-74页
     ·SlAN2基因过表达影响番茄果实类胡萝卜素的积累第74页
     ·SlAN2基因过表达影响类胡萝卜素合成相关基因的表达第74页
     ·SlAN2基因过表达加快转基因番茄果实软化第74页
     ·SlAN2基因过表达促进乙烯的产生第74-76页
     ·SlAN2基因过表达使成熟相关和乙烯相关基因表达上调第76-78页
4 讨论第78-83页
   ·SlAN2基因编码一个核定位的R2R3-MYB转录因子第78页
   ·过表达SlAN2提高转基因烟草抵抗低温胁迫的能力第78-79页
   ·过表达SlAN2提高转基因烟草抵抗MV诱导的氧化胁迫的能力第79页
   ·过表达SlAN2提高转基因番茄的耐热性第79-81页
   ·过表达SlAN2影响转基因番茄果实的成熟第81-83页
5 结论第83-84页
参考文献第84-94页
致谢第94-95页
攻读学位期间发表的论文第95页

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