中文摘要 | 第1-13页 |
Abstract | 第13-16页 |
1 前言 | 第16-26页 |
·MYB转录因子研究进展 | 第16页 |
·MYB转录因子结构及分类 | 第16页 |
·R2R3-MYB转录因子的生物学功能 | 第16页 |
·植物花青素的功能及合成机制 | 第16-21页 |
·花青素的功能 | 第17-19页 |
·抗氧化 | 第17页 |
·光保护 | 第17-18页 |
·抗低温 | 第18-19页 |
·抗高温 | 第19页 |
·营养和药用价值 | 第19页 |
·花青素合成途径 | 第19-20页 |
·花青素合成的调控 | 第20-21页 |
·植物ROS的产生及清除 | 第21页 |
·植物ROS的产生 | 第21页 |
·植物ROS清除机制 | 第21页 |
·低温胁迫对植物的影响 | 第21-22页 |
·高温胁迫对植物的影响 | 第22-23页 |
·果实成熟的研究 | 第23-24页 |
·果实的成熟类型 | 第23页 |
·调控果实成熟的转录因子 | 第23页 |
·乙烯对果实成熟的影响 | 第23-24页 |
·细胞壁的降解和果实软化 | 第24页 |
·本研究的目的意义 | 第24-26页 |
2 材料与方法 | 第26-49页 |
·实验材料 | 第26-28页 |
·植物材料 | 第26页 |
·材料的培养和处理 | 第26页 |
·菌株与质粒 | 第26页 |
·酶及生化试剂 | 第26页 |
·PCR引物 | 第26-28页 |
·实验方法 | 第28-49页 |
·总RNA的提取 | 第28页 |
·cDNA第一条链的合成 | 第28-29页 |
·番茄SlAN2基因的克隆 | 第29-30页 |
·真核表达载体的构建 | 第30-37页 |
·正、反义表达载体的构建 | 第30-31页 |
·连接 | 第31页 |
·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第31页 |
·转化及克隆筛选 | 第31-32页 |
·提取质粒DNA(试剂盒) | 第32页 |
·重组质粒的酶切鉴定 | 第32-33页 |
·回收目的片段(DNA回收试剂盒) | 第33页 |
·DNA序列测定 | 第33-34页 |
·根癌农杆菌LBA4404感受态细胞的制备与转化 | 第34页 |
·农杆菌介导转化番茄 | 第34-36页 |
·农杆菌介导转化烟草 | 第36-37页 |
·转基因植株的PCR鉴定 | 第37-40页 |
·提取基因组DNA | 第37-38页 |
·转基因植株的PCR鉴定 | 第38-39页 |
·qRT-PCR检测转基因番茄中SlAN2转录水平 | 第39页 |
·花青素合成途径相关基因的qRT-PCR分析 | 第39页 |
·果实成熟相关基因的qRT-PCR分析 | 第39-40页 |
·D1蛋白的Western杂交 | 第40-44页 |
·类囊体膜的制备 | 第40页 |
·利用试管微量沉淀法测定抗血清效价 | 第40-41页 |
·聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第41页 |
·尿素-SDS-PAGE | 第41-42页 |
·半干法蛋白转移 | 第42-43页 |
·免疫检测 | 第43页 |
·显色反应 | 第43-44页 |
·SlAN2蛋白的定位 | 第44页 |
·构建pBI121-SlAN2-GFP表达载体 | 第44页 |
·SlAN2蛋白亚细胞定位 | 第44页 |
·生理指标的测定 | 第44-49页 |
·花青素含量测定 | 第45页 |
·H_2O_2的染色 | 第45页 |
·O_2·~-的染色 | 第45页 |
·H_2O_2定量检测 | 第45页 |
·O_2·~-定量检测 | 第45-46页 |
·净光合速率的测量 | 第46页 |
·叶绿素荧光的测定 | 第46页 |
·叶绿素含量测定 | 第46页 |
·膜电解质外渗测定 | 第46页 |
·DPPH法测定抗氧化能力 | 第46-47页 |
·番茄果实硬度的测定 | 第47页 |
·番茄果实色素的提取 | 第47页 |
·番茄果实色素含量的测定 | 第47-48页 |
·番茄红素等标准曲线的绘制 | 第48页 |
·番茄果实中乙烯含量的测定 | 第48页 |
·配制标准气体 | 第48页 |
·样品乙烯测定 | 第48-49页 |
3 结果与分析 | 第49-78页 |
·SlAN2转录因子的分离及其特征 | 第49-50页 |
·SlAN2转录因子全长cDNA序列的克隆 | 第49-50页 |
·SlAN2基因的序列分析 | 第50页 |
·SlAN2蛋白的亚细胞定位 | 第50-52页 |
·SlAN2在番茄中的表达分析 | 第52-53页 |
·SlAN2在番茄不同器官中的表达 | 第52页 |
·SlAN2在不同逆境胁迫下的表达分析 | 第52-53页 |
·正、反义表达载体的构建 | 第53-55页 |
·SlAN2基因在烟草中的遗传转化 | 第55-59页 |
·过表达SlAN2基因烟草的获得及表达分析 | 第55-56页 |
·SlAN2基因过表达提高了转基因烟草的花青素含量 | 第56页 |
·SlAN2基因过表达提高了烟草中花青素合成相关基因的表达水平 | 第56-59页 |
·SlAN2基因过表达提高了烟草的耐冷性 | 第59-62页 |
·低温胁迫下生长状况分析 | 第59-60页 |
·SlAN2基因过表达减轻了低温胁迫下PSII的光抑制 | 第60页 |
·SlAN2基因过表达提高了烟草低温胁迫下的光合速率 | 第60-62页 |
·SlAN2基因过表达提高烟草抗氧化胁迫能力 | 第62-64页 |
·SlAN2基因过表达减轻了MV处理对烟草叶片的光漂白作用 | 第62-63页 |
·SlAN2过表达对氧化胁迫下烟草Fv/Fm的影响 | 第63页 |
·SlAN2过表达对氧化胁迫下烟草膜稳定性的影响 | 第63-64页 |
·SlAN2基因在番茄中的遗传转化 | 第64-67页 |
·转SlAN2基因番茄的获得及PCR鉴定 | 第64页 |
·SlAN2基因在转正义基因番茄中的表达分析 | 第64-65页 |
·SlAN2基因过表达提高了转基因番茄的花青素含量 | 第65页 |
·SlAN2基因过表达提高了花青素合成相关基因的表达水平 | 第65-67页 |
·SlAN2基因过表达提高了转基因番茄的耐热性 | 第67-71页 |
·高温胁迫下生长状况分析 | 第67页 |
·SlAN2基因过表达减轻转基因番茄在高温下的膜损伤 | 第67页 |
·SlAN2基因过表达减轻了高温胁迫下PSII的光抑制 | 第67-69页 |
·SlAN2基因过表达提高了番茄高温胁迫下的光合速率 | 第69页 |
·SlAN2基因过表达对高温胁迫下番茄D1蛋白的影响 | 第69页 |
·SlAN2基因过表达对高温胁迫下番茄活性氧积累的影响 | 第69-71页 |
·SlAN2基因过表达对高温胁迫下番茄抗氧化性能的影响 | 第71页 |
·SlAN2基因过表达对番茄果实成熟的影响 | 第71-78页 |
·SlAN2基因过表达在番茄果实成熟中具有重要作用 | 第71-74页 |
·SlAN2基因过表达影响番茄果实类胡萝卜素的积累 | 第74页 |
·SlAN2基因过表达影响类胡萝卜素合成相关基因的表达 | 第74页 |
·SlAN2基因过表达加快转基因番茄果实软化 | 第74页 |
·SlAN2基因过表达促进乙烯的产生 | 第74-76页 |
·SlAN2基因过表达使成熟相关和乙烯相关基因表达上调 | 第76-78页 |
4 讨论 | 第78-83页 |
·SlAN2基因编码一个核定位的R2R3-MYB转录因子 | 第78页 |
·过表达SlAN2提高转基因烟草抵抗低温胁迫的能力 | 第78-79页 |
·过表达SlAN2提高转基因烟草抵抗MV诱导的氧化胁迫的能力 | 第79页 |
·过表达SlAN2提高转基因番茄的耐热性 | 第79-81页 |
·过表达SlAN2影响转基因番茄果实的成熟 | 第81-83页 |
5 结论 | 第83-84页 |
参考文献 | 第84-94页 |
致谢 | 第94-95页 |
攻读学位期间发表的论文 | 第95页 |