| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-12页 |
| 文献综述 | 第12-19页 |
| 英文缩写词表 | 第19-20页 |
| 引言 | 第20-21页 |
| 1 材料和方法 | 第21-47页 |
| ·试验材料 | 第21-25页 |
| ·主要菌种和质粒 | 第21-22页 |
| ·主要试剂 | 第22页 |
| ·主要仪器设备 | 第22-23页 |
| ·主要培养基及试剂配制 | 第23-24页 |
| ·实验动物 | 第24-25页 |
| ·试验方法 | 第25-47页 |
| ·鸭MAPK1、NOD1基因PCR引物设计 | 第25页 |
| ·组织总RNA提取和反转录反应 | 第25-26页 |
| ·组织总RNA提取 | 第25-26页 |
| ·去除总RNA中DNA和基因组反应 | 第26页 |
| ·RT-PCR反应 | 第26页 |
| ·目的基因片段的扩增 | 第26-28页 |
| ·PCR扩增、产物回收 | 第26-27页 |
| ·PCR产物链接到T载体 | 第27-28页 |
| ·鸭MAPK1全基因序列的克隆鉴定 | 第28-34页 |
| ·3'RACE反应 | 第29-31页 |
| ·5'RACE反应 | 第31-34页 |
| ·序列比对和基因同源性分析 | 第34页 |
| ·鸭MAPK1的蛋白表达及纯化 | 第34-38页 |
| ·重组原核表达质粒的构建 | 第35页 |
| ·原核表达质粒的双酶切鉴定 | 第35-36页 |
| ·重组蛋白MAPK1的诱导表达 | 第36-37页 |
| ·重组蛋白MAPK1的纯化 | 第37-38页 |
| ·鸭MAPK1多克隆抗体的制备 | 第38-39页 |
| ·动物免疫 | 第38页 |
| ·收集多抗血清 | 第38页 |
| ·间接ELISA方法检测血清效价 | 第38-39页 |
| ·多克隆抗体的Western blot分析 | 第39页 |
| ·鸭MAPK1单克隆抗体的制备 | 第39-44页 |
| ·动物免疫 | 第39-40页 |
| ·骨髓瘤细胞悬液的制备 | 第40页 |
| ·脾淋巴细胞的制备 | 第40-41页 |
| ·饲养细胞的制备 | 第41页 |
| ·杂交瘤细胞的融合 | 第41-42页 |
| ·杂交瘤细胞的筛选和克隆化 | 第42页 |
| ·杂交瘤细胞的冻存与复苏 | 第42-43页 |
| ·腹水的制备 | 第43页 |
| ·单克隆抗体的Western blot鉴定 | 第43-44页 |
| ·单克隆抗体亚类的鉴定 | 第44页 |
| ·实时荧光定量PCR检测方法的建立 | 第44-47页 |
| ·实时荧光定量PCR引物的设计 | 第44页 |
| ·实时荧光定量PCR模板的合成 | 第44-45页 |
| ·实时荧光定量PCR体系的建立 | 第45页 |
| ·实时荧光定量PCR标准曲线的绘制 | 第45页 |
| ·实时荧光定量PCR特异性检测 | 第45-46页 |
| ·实时荧光定量PCR敏感性检测 | 第46页 |
| ·实时荧光定量PCR重复性检测 | 第46页 |
| ·实时荧光定量PCR检测方法的临床应用 | 第46-47页 |
| 2. 结果与分析 | 第47-64页 |
| ·鸭MAPK1、NOD1基因的克隆 | 第47-49页 |
| ·鸭MAPK1、NOD1基因片段的克隆 | 第47页 |
| ·鸭MAPK1全基因的克隆 | 第47-49页 |
| ·基因的序列比对和同源性分析 | 第49-57页 |
| ·鸭MAPK1原核表达和蛋白纯化 | 第57-58页 |
| ·鸭MAPK1编码区基因的克隆 | 第57页 |
| ·鸭MAPK1重组表达质粒的构建 | 第57-58页 |
| ·鸭MAPKl重组菌原核表达和蛋白纯化 | 第58页 |
| ·鸭MAPK1多克隆抗体的制备 | 第58-59页 |
| ·间接ELISA方法的建立 | 第58页 |
| ·多克隆抗体效价的测定 | 第58-59页 |
| ·多克隆抗体的Western blot分析 | 第59页 |
| ·鸭MAPK1单克隆抗体的制备 | 第59-61页 |
| ·杂交瘤细胞的制备 | 第59页 |
| ·小鼠腹水单克隆抗体效价的测定 | 第59-60页 |
| ·单克隆抗体的Western blot分析 | 第60页 |
| ·单克隆抗体亚类的鉴定 | 第60-61页 |
| ·实时荧光定量PCR检测鸭MAPK1、NOD1方法的建立 | 第61-64页 |
| ·实时荧光定量PCR体系的建立 | 第61页 |
| ·标准曲线的绘制 | 第61-62页 |
| ·实时荧光定量PCR的特异性、敏感性和重复性检测 | 第62-63页 |
| ·实时荧光定量PCR临床应用 | 第63-64页 |
| 3. 讨论 | 第64-67页 |
| ·鸭MAPK1和NOD1的克隆、表达和蛋白纯化 | 第64-65页 |
| ·鸭MAPK1抗体的制备 | 第65-66页 |
| ·鸭MAPK1和NOD1实时荧光定量PCR检测方法的建立和初步应用 | 第66-67页 |
| 4 结论 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-76页 |
| 致谢 | 第76-78页 |
| 作者简介 | 第78页 |
| 硕士期间发表文章 | 第78页 |