| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-13页 |
| 第一章 前言 | 第13-24页 |
| ·纤维素酶研究概况 | 第13-16页 |
| ·纤维素的简介 | 第13-14页 |
| ·纤维素酶的简介 | 第14-16页 |
| ·β-葡萄糖苷酶简介 | 第16-19页 |
| ·β-葡萄糖苷酶的定义和分类 | 第16-17页 |
| ·β-葡萄糖苷酶的结构 | 第17页 |
| ·β-葡萄糖苷酶的理化性质 | 第17-18页 |
| ·β-葡萄糖苷酶的应用 | 第18-19页 |
| ·宏基因学简介 | 第19-21页 |
| ·宏基因组学概念 | 第19-20页 |
| ·宏基因组学的研究策略 | 第20页 |
| ·宏基因组技术的应用 | 第20-21页 |
| ·秸秆还田土壤的简介 | 第21-22页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第22-23页 |
| ·本论文的主要研究内容 | 第23-24页 |
| 第二章 玉米秸秆还田土壤宏基因组文库构建及新型β-葡萄糖苷酶基因的筛选 | 第24-42页 |
| 引言 | 第24-25页 |
| ·实验材料 | 第25-28页 |
| ·实验样品来源 | 第25页 |
| ·菌种和质粒 | 第25页 |
| ·主要仪器和设备 | 第25-26页 |
| ·培养基 | 第26页 |
| ·工具酶、试剂盒和其他试剂 | 第26-27页 |
| ·相关溶液的配制 | 第27-28页 |
| ·实验方法 | 第28-33页 |
| ·玉米秸秆还田土壤基因组总DNA的提取及纯化 | 第28-29页 |
| ·玉米秸秆还田土壤宏基因组文库的构建 | 第29-32页 |
| ·宏基因组文库的评估 | 第32页 |
| ·土壤宏基因组文库β-葡萄糖苷酶的筛选 | 第32页 |
| ·测序及序列的生物信息学分析 | 第32-33页 |
| ·实验结果与分析 | 第33-41页 |
| ·玉米秸秆还田土壤总DNA的提取及纯化 | 第33页 |
| ·土壤总DNA的不完全酶切 | 第33-35页 |
| ·土壤宏基因组文库的评估 | 第35-36页 |
| ·土壤宏基因组文库中β-葡萄糖苷酶的筛选 | 第36页 |
| ·β-葡萄糖苷酶阳性克隆子的酶切验证 | 第36-37页 |
| ·测序及生物信息学分析 | 第37-39页 |
| ·Bgl2238的氨基酸序列、二级结构分析 | 第39-41页 |
| ·本章小结与讨论 | 第41-42页 |
| 第三章 β-葡萄糖苷酶基因的原核表达、表达条件优化及其酶学性质研究 | 第42-72页 |
| 引言 | 第42页 |
| ·实验材料 | 第42-46页 |
| ·各种试剂的配制 | 第42-45页 |
| ·菌种与质粒 | 第45页 |
| ·主要试剂 | 第45页 |
| ·培养基 | 第45页 |
| ·主要仪器设备 | 第45-46页 |
| ·实验方法 | 第46-55页 |
| ·β-葡萄糖苷酶基因bgl2238的引物设计及合成 | 第46页 |
| ·β-葡萄糖苷酶基因bgl2238的克隆 | 第46-47页 |
| ·PCR产物的纯化 | 第47页 |
| ·PCR产物和载体的双酶切、回收 | 第47页 |
| ·bgl2238与载体连接 | 第47-48页 |
| ·E .coli BL21(DE3)钙转感受态细胞的制备及转化 | 第48页 |
| ·重组克隆子的筛选及鉴定 | 第48-49页 |
| ·重组表达菌株表达条件的优化及纯化 | 第49-50页 |
| ·目的基因的诱导表达 | 第50页 |
| ·重组β-葡萄糖苷酶Bgl2238的纯化 | 第50-51页 |
| ·重组β-葡萄糖苷酶Bgl2238的SDS-PAGE凝胶检测 | 第51-52页 |
| ·标准曲线的制作 | 第52-53页 |
| ·重组β-葡萄糖苷酶Bgl2238的酶学性质研究 | 第53-55页 |
| ·实验结果和分析 | 第55-69页 |
| ·β-葡萄糖苷酶基因bgl2238的克隆 | 第55-56页 |
| ·重组表达载体的验证 | 第56-57页 |
| ·重组β-葡萄糖苷酶表达条件的优化 | 第57-60页 |
| ·重组蛋白Bgl2238的分离纯化 | 第60-61页 |
| ·β-葡萄糖苷酶酶学性质分析 | 第61-69页 |
| ·本章小结与讨论 | 第69-72页 |
| 第四章 β-葡萄糖苷酶酿酒酵母真核表达 | 第72-82页 |
| 引言 | 第72-73页 |
| ·实验材料 | 第73-75页 |
| ·菌株与质粒载体 | 第73页 |
| ·酶和生化试剂 | 第73页 |
| ·试剂盒 | 第73页 |
| ·培养基 | 第73-75页 |
| ·实验仪器 | 第75页 |
| ·实验方法 | 第75-77页 |
| ·β-葡萄糖苷酶基因的引物设计与合成 | 第75页 |
| ·基因的PCR扩增、酶切、载体连接和化转大肠杆菌DH5a | 第75页 |
| ·重组子的筛选及鉴定 | 第75页 |
| ·酿酒酵母INVSC1电转感受态的制备及转化方法 | 第75-76页 |
| ·酵母重组子的鉴定 | 第76页 |
| ·重组蛋白Bgl2238的表达和纯化 | 第76-77页 |
| ·重组蛋白Bgl2238的SDS-PAGE凝胶检测 | 第77页 |
| ·实验结果和分析 | 第77-80页 |
| ·β-葡萄糖苷酶基因的鉴定 | 第77-78页 |
| ·酵母重组子pYES2-bgl2238的鉴定 | 第78-80页 |
| ·重组Bgl2238的诱导表达和分离纯化 | 第80页 |
| ·本章小结与讨论 | 第80-82页 |
| 第五章 总结与展望 | 第82-84页 |
| ·结论 | 第82-83页 |
| ·展望 | 第83-84页 |
| 参考文献 | 第84-91页 |
| 缩略词 | 第91-92页 |
| 附录 硕士研究生期间发表论文 | 第92-93页 |
| 致谢 | 第93页 |
