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人RPP蛋白对丙肝病毒复制的负调控作用的研究

摘要第1-6页
Abstract第6-8页
前言第8-16页
第一部分 人源化RPP蛋白与HCV RNA体外结合的实验研究第16-44页
   ·研究目的第16页
   ·实验仪器、材料与试剂第16-23页
     ·实验仪器第16-17页
     ·实验材料第17-18页
     ·实验试剂第18-20页
     ·本章所用到的实验溶液的配制第20-23页
   ·实验方法第23-33页
     ·RPP基因慢病毒载体的构建第23-29页
     ·稳定表达RPP蛋白的HEK293细胞系的建立第29页
     ·人源化RPP蛋白表达的免疫印记验证第29-31页
     ·人源化RPP蛋白的表达及纯化第31页
     ·HCV RNA 5’ UTR的体外转录及与人源化RPP蛋白结合实验第31-33页
   ·实验结果第33-41页
     ·RPP基因慢病毒载体的构建结果第33-35页
     ·稳定表达RPP蛋白的HEK293细胞系的细胞显微图像及免疫印记验证结果第35-37页
     ·稳转细胞系的流式细胞仪分选及分选后的细胞显微图像结果第37-39页
     ·纯化后的人源化RPP蛋白的SDS-PAGE检测及浓度检测第39-40页
     ·RPP蛋白与HCV基因组RNA 5’ UTR结合能力检测第40-41页
   ·小结与讨论第41-44页
第二部分 在Huh7.5.1 细胞系中过表达和下调表达RPP蛋白对HCV增殖的影响第44-58页
   ·研究目的第44页
   ·实验仪器、材料和试剂第44-46页
     ·实验仪器第44-45页
     ·实验材料第45页
     ·实验试剂第45-46页
   ·实验方法第46-51页
     ·构建稳定表达RPP20,RPP21,RPP25,RPP29基因的Huh7.5.1 细胞系第46页
     ·RPP20,RPP21,RPP25,RPP29干扰RNA(sh RNA)的合成第46-47页
     ·细胞的收集及RNA提取第47-48页
     ·RNA逆转录及实时荧光定量PCR(QRT-PCR)第48-49页
     ·在huh7.5.1 细胞系中过表达和干扰RPP蛋白表达的免疫印记验证第49-51页
   ·实验结果第51-56页
     ·RPP蛋白过表达和干扰QRT-PCR检测第51-52页
     ·RPP蛋白过表达和干扰western-blot检测第52-54页
     ·RPP蛋白过表达和下调表达对HCV RNA复制的影响第54-56页
   ·小结与讨论第56-58页
第三部分 全文总结第58-60页
参考文献第60-65页
附录第65-68页
 附录一 缩略词中英文对照第65-66页
 附录二 构建的RPP20,RPP21,RPP25,RPP29慢病毒载体图谱第66-67页
 附录三 硕士期间发表的论文第67-68页
致谢第68页

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