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副猪嗜血杆菌二硫键氧化还原酶DsbA生化特性和功能的初步研究

摘要第1-9页
Abstract第9-11页
缩略词表(Abbreviation)第11-12页
1 文献综述第12-20页
   ·副猪嗜血杆菌病概述第12页
   ·副猪嗜血杆菌致病机理第12-13页
   ·副猪嗜血杆菌生长与铁源的利用第13-15页
     ·副猪嗜血杆菌生长影响因素第14页
     ·铁的摄取过程第14-15页
   ·二硫键(DSB)系统概述第15-16页
   ·二硫键氧化还原酶研究进展第16-19页
     ·二硫键氧化还原酶同系物研究进展第17-18页
     ·二硫键氧化还原酶与细菌致病力研究进展第18-19页
   ·小结与展望第19-20页
2 研究目的与意义第20-21页
3 材料和方法第21-40页
   ·实验材料第21-26页
     ·菌株、质粒载体第21页
     ·酶、试剂、试剂盒第21页
     ·主要细菌培养基及抗生素的配制第21-22页
     ·主要溶液的配制第22-24页
     ·引物第24-26页
   ·实验方法第26-40页
     ·dsbA同源重组质粒的构建第26-29页
     ·自然转化筛选 ΔdsbA缺失株第29-31页
     ·C-dsbA1互补质粒的构建第31页
     ·ΔdsbA缺失株和C-dsbA1互补菌株的鉴定第31-34页
     ·铜敏感实验第34页
     ·胰岛素还原实验第34-38页
     ·DTT敏感实验第38页
     ·SH0165、ΔdsbA和C-dsbA1生长曲线的测定第38页
     ·扫描电镜观察SH0165和 ΔdsbA1菌体形态第38-39页
     ·铁螯合生长实验第39页
     ·血清抗性实验第39-40页
4 结果和分析第40-53页
   ·dsbA同源重组质粒的构建第40-41页
   ·ΔdsbA缺失株的鉴定第41-43页
     ·ΔdsbA缺失株PCR鉴定第41-42页
     ·RT-PCR验证 ΔdsbA缺失株第42-43页
     ·Southern blot验证 ΔdsbA1缺失株第43页
   ·dsbA1互补菌株的构建和鉴定第43-44页
     ·pSHK3-C-dsbA1质粒的构建第43-44页
     ·SH0165-C-dsbA1互补菌株的鉴定第44页
   ·DsbA1和DsbA2生化特性分析第44-49页
     ·铜敏感实验体内检测DsbA的异构酶功能第44-45页
     ·胰岛素还原实验体外检测DsbA的异构酶功能第45-49页
     ·DTT敏感实验检测DsbA的氧化折叠酶功能第49页
   ·SH0165、ΔdsbA1和C-dsbA1生长曲线的绘制第49-50页
   ·扫描电镜观察SH0165和 ΔdsbA1菌体形态第50-51页
   ·铁螯合生长实验第51页
   ·血清抗性实验第51-53页
5 讨论第53-56页
   ·SH0165中dsbA缺失株的成功构建第53页
   ·DsbA生化特性初步揭示两者的蛋白功能第53-54页
   ·dsbA1缺失显著影响SH0165的生长第54-55页
   ·dsbA1缺失影响铁的利用第55页
   ·dsbA1与血清抗性有关第55-56页
6 结论第56-57页
参考文献第57-65页
附录第65-66页
致谢第66页

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