| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 第一章 绪论 | 第9-23页 |
| ·丙酸杆菌 | 第9-11页 |
| ·丙酸菌的特性 | 第9-10页 |
| ·丙酸菌的安全性 | 第10-11页 |
| ·维生素B12 | 第11-16页 |
| ·维生素B_(12)概述 | 第11页 |
| ·维生素B_(12)的生理功能 | 第11-13页 |
| ·维生素B_(12)的生物合成 | 第13-15页 |
| ·维生素B_(12)的研究现状与应用前景 | 第15-16页 |
| ·基因敲除 | 第16-19页 |
| ·基因敲除简介 | 第16页 |
| ·基因敲除的原理 | 第16页 |
| ·基因敲除中的打靶策略 | 第16-17页 |
| ·基因敲除载体的选择 | 第17-18页 |
| ·基因敲除技术的应用 | 第18-19页 |
| ·聚合酶链式反应技术 | 第19-20页 |
| ·聚合酶链式反应基本原理 | 第19-20页 |
| ·聚合酶链式反应的引物设计 | 第20页 |
| ·16S rDNA | 第20-21页 |
| ·本课题的研究工作 | 第21-23页 |
| ·本课题研究内容 | 第21-22页 |
| ·本课题研究意义 | 第22-23页 |
| 第二章 奶酪中丙酸杆菌的分离和初步鉴定 | 第23-32页 |
| ·实验材料 | 第23-26页 |
| ·实验菌 | 第23页 |
| ·实验试剂 | 第23-24页 |
| ·试验仪器 | 第24-25页 |
| ·培养基 | 第25-26页 |
| ·实验方法 | 第26-29页 |
| ·奶酪样品 | 第26页 |
| ·厌氧罐的制备 | 第26页 |
| ·丙酸菌的分离 | 第26-27页 |
| ·革兰氏染色 | 第27-28页 |
| ·液氮研磨法提取分离菌的DNA | 第28页 |
| ·分离菌的鉴定 | 第28-29页 |
| ·实验结果 | 第29-32页 |
| ·革兰氏染色鉴定 | 第29页 |
| ·DNA的电泳检测 | 第29-30页 |
| ·16S rDNA PCR | 第30-32页 |
| 第三章 构建打靶质粒 | 第32-52页 |
| ·实验材料 | 第32-33页 |
| ·实验菌种 | 第32页 |
| ·培养基 | 第32-33页 |
| ·实验仪器与试剂 | 第33页 |
| ·实验流程图 | 第33页 |
| ·试验流程 | 第33-41页 |
| ·液氮研磨法提取丙酸杆菌染色体DNA | 第33页 |
| ·碱裂解法提质粒 | 第33-35页 |
| ·引物设计 | 第35页 |
| ·PCR扩增目的片段 | 第35-36页 |
| ·电泳检测及切胶纯化 | 第36-37页 |
| ·与pMD19-T的连接 | 第37页 |
| ·转化反应及蓝白斑筛选 | 第37-39页 |
| ·重组T载体中同源臂方向的判断 | 第39页 |
| ·酶切反应 | 第39-40页 |
| ·目的条带切胶纯化 | 第40页 |
| ·目的片段间的连接反应 | 第40-41页 |
| ·转化及蓝白班筛选 | 第41页 |
| ·重组菌的鉴定 | 第41页 |
| ·结果与讨论 | 第41-52页 |
| ·PCR产物的鉴定 | 第41-42页 |
| ·重组T载体的蓝白斑筛选 | 第42-43页 |
| ·同源臂方向的判断 | 第43页 |
| ·重组T载体与psk载体的双酶切 | 第43-45页 |
| ·亚克隆重组子的鉴定 | 第45-46页 |
| ·重组质粒psk-armⅡ与pPK705载体的双酶切 | 第46页 |
| ·连接产物的鉴定 | 第46-48页 |
| ·重组质粒双酶切的鉴定 | 第48-49页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第49-50页 |
| ·同源重组的鉴定 | 第50-52页 |
| 第四章 结论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-55页 |
| 致谢 | 第55页 |