| 目录 | 第1-10页 |
| 摘要 | 第10-13页 |
| ABSTRACT | 第13-16页 |
| 论文缩写词表 | 第16-17页 |
| 第一章 绪论 | 第17-40页 |
| ·酚类污染物 | 第17-20页 |
| ·酚类污染物的毒害 | 第17-19页 |
| ·酚类污染物的治理 | 第19-20页 |
| ·多环芳烃污染物 | 第20-22页 |
| ·多环芳烃污染物的毒害 | 第20-21页 |
| ·多环芳烃污染物的治理 | 第21-22页 |
| ·芳香族化合物的微生物降解途径 | 第22-30页 |
| ·芳香族化合物的好氧降解 | 第22-27页 |
| ·芳香族化合物的厌氧降解 | 第27-30页 |
| ·邻苯二酚2，3-双加氧酶及其应用 | 第30-35页 |
| ·不同来源的邻苯二酚2，3-双加氧酶及其性质 | 第30-33页 |
| ·邻苯二酚2，3-双加氧酶的反应机制 | 第33-35页 |
| ·邻苯二酚2，3-双加氧酶的应用 | 第35页 |
| ·代谢工程、基因工程与芳香族化合物降解 | 第35-38页 |
| ·伯克霍尔德氏菌 | 第38-40页 |
| 第二章 苯酚降解菌 L68的分离鉴定及苯酚降解性能测定 | 第40-52页 |
| ·材料与方法 | 第40-43页 |
| ·实验材料 | 第40-41页 |
| ·苯酚降解菌筛选 | 第41页 |
| ·细菌总 DNA的提取 | 第41-42页 |
| ·PCR扩增 | 第42页 |
| ·16S rDNA测序及同源性比较 | 第42页 |
| ·形态及生理生化鉴定 | 第42页 |
| ·多底物降解特性 | 第42页 |
| ·苯酚降解性能测定 | 第42-43页 |
| ·固定化细胞制备 | 第43页 |
| ·分析方法 | 第43页 |
| ·结果与讨论 | 第43-51页 |
| ·苯酚降解菌的分离及筛选 | 第43-44页 |
| ·16S rDNA序列分析 | 第44-45页 |
| ·形态及生理生化特征 | 第45-47页 |
| ·多底物降解特性 | 第47页 |
| ·苯酚降解性能测定 | 第47-51页 |
| ·小结 | 第51-52页 |
| 第三章 邻苯二酚2，3-双加氧酶的分离纯化及性质研究 | 第52-78页 |
| ·材料与方法 | 第52-56页 |
| ·实验材料 | 第52-53页 |
| ·种子液制备 | 第53页 |
| ·正交实验优化产酶条件 | 第53页 |
| ·细胞抽提液的制备 | 第53页 |
| ·邻苯二酚2，3-双加氧酶的分离纯化 | 第53-54页 |
| ·酶的分子量与等电点测定 | 第54页 |
| ·酶的动力学常数测定 | 第54页 |
| ·邻苯二酚2，3-双加氧酶光谱学分析 | 第54-55页 |
| ·pH值对酶的影响 | 第55页 |
| ·温度对酶的影响 | 第55-56页 |
| ·金属离子与鳌合剂对酶的影响 | 第56页 |
| ·各种化合物对酶的影响 | 第56页 |
| ·其他分析方法 | 第56页 |
| ·结果与讨论 | 第56-76页 |
| ·产酶条件优化 | 第56-58页 |
| ·邻苯二酚2，3-双加氧酶的分离纯化 | 第58-59页 |
| ·酶分子量与等电点测定 | 第59页 |
| ·酶的动力学常数测定 | 第59-61页 |
| ·邻苯二酚2，3-双加氧酶光谱学分析 | 第61-64页 |
| ·pH值对酶的影响 | 第64-66页 |
| ·温度对酶的影响 | 第66-69页 |
| ·金属离子与螯合剂溶液对酶活力的影响 | 第69-71页 |
| ·各种化合物对酶的影响 | 第71-76页 |
| ·小结 | 第76-78页 |
| 第四章 邻苯二酚2，3-双加氧酶生物传感器 | 第78-84页 |
| ·材料与方法 | 第79-81页 |
| ·实验材料 | 第79页 |
| ·邻苯二酚2，3-双加氧酶的制备 | 第79-80页 |
| ·邻苯二酚2，3-双加氧酶传感器性能测试 | 第80-81页 |
| ·固定化酶膜制备及固定化酶传感器性能测定 | 第81页 |
| ·结果与讨论 | 第81-83页 |
| ·传感器测定参数选择 | 第81页 |
| ·传感器性能测试 | 第81-82页 |
| ·固定化酶传感器性能测定 | 第82-83页 |
| ·小结 | 第83-84页 |
| 第五章 Burkholderia cepacia L68双加氧酶区基因筛选 | 第84-97页 |
| ·材料与方法 | 第84-87页 |
| ·实验材料 | 第84-85页 |
| ·细菌总 DNA及质粒提取 | 第85页 |
| ·酶切 | 第85页 |
| ·去磷酸化 | 第85-86页 |
| ·连接 | 第86页 |
| ·细菌感受态制备 | 第86页 |
| ·转化 | 第86页 |
| ·双加氧酶区基因筛选 | 第86页 |
| ·序列测定、拼接与比对 | 第86-87页 |
| ·蛋白特征分析预测 | 第87页 |
| ·结果与讨论 | 第87-96页 |
| ·细菌总DNA的提取及酶切 | 第87页 |
| ·双加氧酶区基因筛选 | 第87-88页 |
| ·重组质粒pB2k的序列测定、拼接与比对 | 第88-91页 |
| ·B.cepacia L68邻苯二酚2，3-双加氧酶基因序列分析 | 第91-93页 |
| ·双加氧酶区其他基因特征分析 | 第93-96页 |
| ·小结 | 第96-97页 |
| 第六章 phnE基因的克隆、高效表达、包涵体纯化及复性 | 第97-108页 |
| ·材料与方法 | 第97-101页 |
| ·实验材料 | 第97页 |
| ·细菌总DNA提取 | 第97页 |
| ·PCR扩增phnE基因 | 第97-98页 |
| ·重组pET32a-phnE质粒的构建 | 第98-99页 |
| ·重组子筛选与验证 | 第99-100页 |
| ·重组蛋白的诱导表达 | 第100页 |
| ·重组蛋白包涵体变性 | 第100页 |
| ·包涵体纯化 | 第100页 |
| ·重组蛋白包涵体复性 | 第100页 |
| ·其它分析方法 | 第100-101页 |
| ·结果与讨论 | 第101-106页 |
| ·重组质粒的构建 | 第101-102页 |
| ·重组蛋白的诱导表达 | 第102-104页 |
| ·重组蛋白包涵体纯化及复性 | 第104-106页 |
| ·复性后重组蛋白酶活性分析 | 第106页 |
| ·小结 | 第106-108页 |
| 第七章 石油污染土壤中phnE基因的竞争性PCR检测与定量 | 第108-118页 |
| ·材料与方法 | 第108-112页 |
| ·实验材料 | 第108-109页 |
| ·污染土壤总 DNA的提取 | 第109页 |
| ·竞争性 DNA构建 | 第109-111页 |
| ·竞争性 PCR | 第111页 |
| ·竞争性 PCR产物鉴定 | 第111-112页 |
| ·其他分析方法 | 第112页 |
| ·结果与讨论 | 第112-116页 |
| ·被污染土壤总 DNA的提取 | 第112页 |
| ·竞争性 DNA构建 | 第112-113页 |
| ·竞争性PCR扩增 | 第113-115页 |
| ·污染土壤中phnE基因的竞争性 PCR检测与定量 | 第115-116页 |
| ·竞争性 PCR产物鉴定 | 第116页 |
| ·小结 | 第116-118页 |
| 参考文献 | 第118-132页 |
| 致谢 | 第132-133页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录与获奖情况 | 第133-135页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第135页 |
