| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 目录 | 第7-10页 |
| 第1章 文献综述 | 第10-19页 |
| ·研究背景 | 第10-11页 |
| ·咖啡因 | 第11-13页 |
| ·咖啡因与其脱甲基产物 | 第11页 |
| ·咖啡因与健康 | 第11-12页 |
| ·咖啡因与环境 | 第12页 |
| ·脱咖啡因技术与方法 | 第12-13页 |
| ·生物降解咖啡因机制 | 第13-14页 |
| ·咖啡因脱甲基酶 | 第13-14页 |
| ·咖啡因氧化酶 | 第14页 |
| ·咖啡因脱甲基酶相关研究进展 | 第14-17页 |
| ·菌的生长与降解效率的关系 | 第14-15页 |
| ·咖啡因降解的动力学研究 | 第15页 |
| ·咖啡因脱甲基酶基因及功能 | 第15-16页 |
| ·咖啡因降解酶的活性检测 | 第16-17页 |
| ·本研究目的与意义 | 第17页 |
| ·研究内容与技术路线图 | 第17-19页 |
| ·筛选并鉴定可降解咖啡因菌株 | 第17页 |
| ·咖啡因降解菌株的驯化与培养条件优化 | 第17页 |
| ·咖啡因代谢相关基因的克隆、蛋白的表达及其功能鉴定 | 第17页 |
| ·技术路线图 | 第17-19页 |
| 第2章 咖啡因降解菌株的筛选鉴定和降解性能分析 | 第19-28页 |
| ·前言 | 第19页 |
| ·实验试剂、仪器、溶液配置及分析方法 | 第19-22页 |
| ·实验试剂与材料 | 第19页 |
| ·实验仪器 | 第19-20页 |
| ·部分溶液、培养基的配置 | 第20-21页 |
| ·可降解咖啡因菌株的筛选 | 第21页 |
| ·菌株鉴定 | 第21-22页 |
| ·生长与降解能力分析 | 第22页 |
| ·结果与讨论 | 第22-27页 |
| ·菌种筛选 | 第22页 |
| ·菌种鉴定 | 第22-27页 |
| ·本章小结 | 第27-28页 |
| 第3章 高耐受咖啡因菌株的驯化和促降解培养基组分优化 | 第28-49页 |
| ·前言 | 第28页 |
| ·实验试剂、仪器、溶液配置及分析方法 | 第28-33页 |
| ·实验试剂与材料 | 第28页 |
| ·实验仪器 | 第28-29页 |
| ·部分溶液、培养基的配置 | 第29-30页 |
| ·菌株驯化 | 第30页 |
| ·驯化菌降解情况分析 | 第30-31页 |
| ·响应面优化培养基组分 | 第31页 |
| ·单因子筛选试验 | 第31页 |
| ·PB设计(Plackett-Burman design) | 第31-32页 |
| ·最陡爬坡试验 | 第32-33页 |
| ·中心组合设计 | 第33页 |
| ·结果与讨论 | 第33-48页 |
| ·降解菌的耐受及驯化 | 第33-35页 |
| ·静息细胞(RC)、裂解上清液(CFL)验证菌株降解特性 | 第35-36页 |
| ·单因素实验 | 第36-37页 |
| ·Plackett-Burman试验确定关键因素 | 第37-39页 |
| ·最陡爬坡试验 | 第39-40页 |
| ·中心组合试验设计 | 第40-43页 |
| ·Pseudomonas putida ECUST5-2促降解响应模型拟合及方差分析 | 第43页 |
| ·Pseudomonas aeruginosa ECUST2-3促降解响应模型拟合及方差分析 | 第43-44页 |
| ·降解菌最佳促降解培养基成分的确定 | 第44-48页 |
| ·本章小结 | 第48-49页 |
| 第4章 咖啡因降解菌株代谢咖啡因相关基因的克隆 | 第49-67页 |
| ·前言 | 第49页 |
| ·实验试剂、仪器、溶液配置及分析方法 | 第49-55页 |
| ·实验试剂与材料 | 第49页 |
| ·实验仪器 | 第49-50页 |
| ·部分溶液、培养基的配置 | 第50-51页 |
| ·降解菌基因组的抽提 | 第51页 |
| ·简并引物的设计与简并扩增 | 第51-52页 |
| ·ndmA基因全长的获取 | 第52页 |
| ·ndmB基因全长的获取 | 第52页 |
| ·ndmCD基因全长的获取 | 第52页 |
| ·本章节部分实验常用方法 | 第52-55页 |
| ·结果与讨论 | 第55-65页 |
| ·Pseudomonas putida ECUST5-2简并扩增ndmA与ndmB | 第55-57页 |
| ·Pseudomonas putida ECUST5-2 TAIL-PCR探索与随机引物的筛选 | 第57-63页 |
| ·Pseudomonas putida ECUST5-2 ndmCD基因的获取及序列比对分析 | 第63-65页 |
| ·Pseudomonas putida ECUST5-2关键降解咖啡因基因相关表达载体的构建 | 第65页 |
| ·本章小结 | 第65-67页 |
| 第5章 结论与展望 | 第67-70页 |
| ·结论 | 第67-68页 |
| ·课题展望 | 第68-70页 |
| ·国际研究情况 | 第68-69页 |
| ·国内研究情况 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-74页 |
| 致谢 | 第74页 |
