| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 1 前言 | 第11-22页 |
| ·水稻对镉污染胁迫响应的生理机制 | 第11-12页 |
| ·植物对镉污染胁迫响应的分子机制 | 第12-14页 |
| ·钙调蛋白及其 OsR-1-96-B7-cam 基因的研究现状 | 第14-17页 |
| ·蛋白质互作技术及研究进展 | 第17-20页 |
| ·噬菌体展示技术 | 第17页 |
| ·等离子共振技术 | 第17页 |
| ·荧光能量转移技术 | 第17-18页 |
| ·抗体与蛋白质阵列技术 | 第18页 |
| ·酵母双杂交技术 | 第18页 |
| ·pull down 技术 | 第18-19页 |
| ·计算机预测蛋白质-蛋白质相互作用技术 | 第19页 |
| ·Far Western 技术 | 第19页 |
| ·免疫共沉淀技术 | 第19-20页 |
| ·本研究的目的意义 | 第20-22页 |
| 2 材料与方法 | 第22-31页 |
| ·材料 | 第22-23页 |
| ·供试材料 | 第22页 |
| ·供试菌株 | 第22页 |
| ·主要试剂及药品 | 第22-23页 |
| ·主要仪器 | 第23页 |
| ·PCR 引物 | 第23页 |
| ·方法 | 第23-31页 |
| ·putative calmodulin 基因的克隆 | 第23页 |
| ·CaM 目的基因全长的 PCR 扩增与回收纯化 | 第23-24页 |
| ·TA 克隆 | 第24页 |
| ·EcoRⅠ和 HindⅢ双酶切验证 pMD19-T-cam | 第24-25页 |
| ·钙调蛋白基因表达载体的构建 | 第25-26页 |
| ·转化菌株对镉胁迫的适应能力验证 | 第26页 |
| ·OsR-1-96-B7-CaM 融合蛋白在大肠杆菌中的可溶性高效表达与纯化 | 第26-28页 |
| ·抗 OsR-1-96-B7-CaM 融合蛋白的多克隆抗体的制备 | 第28-29页 |
| ·CaM 相互作用蛋白的获得与质谱鉴定 | 第29页 |
| ·钙调蛋白互作蛋白的胰蛋白酶消化和蛋白质谱鉴定 | 第29-31页 |
| 3 结果与分析 | 第31-41页 |
| ·OsR-1-96-B7-cam 基因的克隆和表达载体的构建 | 第31-35页 |
| ·OsR-1-96-B7-cam 基因全长的克隆 | 第31-33页 |
| ·表达载体 pET32a-OsR-1-96-B7-cam 的构建 | 第33-35页 |
| ·转化菌株对镉胁迫的适应能力 | 第35-36页 |
| ·阳性克隆菌与野生型菌的耐镉能力比较 | 第35-36页 |
| ·OsR-1-96-B7-cam 融合蛋白在大肠杆菌中的可溶性高效表达与纯化 | 第36-37页 |
| ·His-OsR-1-96-B7-cam 融合蛋白的高效表达与纯化 | 第36-37页 |
| ·抗 CaM 蛋白的多克隆抗体的制备与验证 | 第37-39页 |
| ·兔子的免疫和血清效价的测定 | 第37-38页 |
| ·Western blot 验证抗 CaM 蛋白的多克隆抗体 | 第38-39页 |
| ·CaM 相互作用蛋白的获得与质谱鉴定 | 第39-41页 |
| ·免疫共沉淀技术（Co-Ip）捕捉与 CaM 相互作用的蛋白质 | 第39-41页 |
| 4 讨论 | 第41-48页 |
| ·水稻镉胁迫响应的分子机制 | 第41-43页 |
| ·钙调蛋白的互作蛋白及其功能 | 第43-45页 |
| ·钙调蛋白在水稻镉胁迫响应中的作用网络 | 第45-48页 |
| 5 结论与展望 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-54页 |
| 附录 | 第54-58页 |
| 致谢 | 第58页 |
