炭疽杆菌GNMT和GalE蛋白表达、纯化和结晶研究
| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 1 文献综述 | 第12-24页 |
| ·炭疽杆菌简介 | 第12-16页 |
| ·生物学特点 | 第12-15页 |
| ·炭疽杆菌病原菌的发现 | 第12-13页 |
| ·炭疽杆菌病原菌的生物学 | 第13页 |
| ·炭疽杆菌病原菌的致病性 | 第13-14页 |
| ·炭疽杆菌病原菌的免疫 | 第14页 |
| ·炭疽杆菌病原菌的检测 | 第14-15页 |
| ·炭疽病预防 | 第15页 |
| ·炭疽病症状及治疗 | 第15-16页 |
| ·甲基转移酶简介 | 第16-19页 |
| ·甲基转移酶的功能 | 第16页 |
| ·甲基转移酶的分类 | 第16-17页 |
| ·甲基转移酶的作用机制 | 第17页 |
| ·甲基转移酶的克隆表达 | 第17页 |
| ·甘氨酸甲基转移酶研究进展 | 第17-19页 |
| ·甘氨酸甲基转移酶的酶学特点 | 第18页 |
| ·甘氨酸甲基转移酶的功能 | 第18页 |
| ·甘氨酸甲基转移酶的结构研究 | 第18-19页 |
| ·异构酶简介 | 第19-20页 |
| ·异构酶的功能 | 第19页 |
| ·异构酶的分类 | 第19页 |
| ·异构酶的克隆表达 | 第19-20页 |
| ·异构酶的应用价值 | 第20页 |
| ·UDP-半乳糖-4-差向异构酶的作用机制 | 第20-22页 |
| ·UDP-半乳糖-4-差向异构酶结构研究 | 第21-22页 |
| ·本实验研究内容和意义 | 第22-24页 |
| 2 实验材料、仪器与方法 | 第24-34页 |
| ·材料与试剂 | 第24页 |
| ·仪器与设备 | 第24-25页 |
| ·实验方法 | 第25-34页 |
| ·PCR、产物鉴定、DNA 的回收 | 第26-28页 |
| ·质粒的抽提 | 第28页 |
| ·连接及菌落 PCR | 第28-29页 |
| ·转化 | 第29页 |
| ·配制 LB 液体培养基和平板 | 第29页 |
| ·挑单菌落及扩大培养 | 第29-30页 |
| ·大肠杆菌中诱导表达 | 第30页 |
| ·镍柱重力洗脱纯化蛋白 | 第30-31页 |
| ·SDS-PAGE 电泳检测 | 第31页 |
| ·分子筛和离子交换柱层析操作步骤 | 第31-32页 |
| ·蛋白质浓度测定 | 第32-33页 |
| ·晶体生长 | 第33-34页 |
| 3 实验结果 | 第34-49页 |
| ·GNMT 基因 PCR 扩增 | 第34-35页 |
| ·GNMT 重组质粒鉴定 | 第35-36页 |
| ·GNMT 目的蛋白的表达检测 | 第36-37页 |
| ·GNMT 蛋白纯化 | 第37-39页 |
| ·Ni-NTA 亲和层析纯化 | 第37页 |
| ·Mono Q 离子交换层析柱纯化 | 第37-38页 |
| ·分子筛层析柱纯化 | 第38-39页 |
| ·蛋白质结晶 | 第39-40页 |
| ·结晶优化 | 第40-42页 |
| ·GalE 基因 PCR 扩增 | 第42-43页 |
| ·GalE 重组质粒鉴定 | 第43-44页 |
| ·GalE 目的蛋白的表达检测 | 第44页 |
| ·GalE 蛋白纯化 | 第44-46页 |
| ·Ni-NTA 亲和层析纯化 | 第44页 |
| ·Mono Q 离子交换层析柱纯化 | 第44-45页 |
| ·分子筛层析柱纯化 | 第45-46页 |
| ·GalE 蛋白质结晶 | 第46-47页 |
| ·GalE 结晶优化 | 第47-49页 |
| 4 讨论 | 第49-53页 |
| ·引物的设计与 PCR | 第49页 |
| ·大肠杆菌克隆载体和表达载体 | 第49-50页 |
| ·重组质粒的双酶切鉴定 | 第50页 |
| ·重组蛋白的表达分离纯化 | 第50-51页 |
| ·蛋白晶体生长 | 第51-53页 |
| 5 结论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-60页 |
| 致谢 | 第60页 |
