| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-22页 |
| 1 血细胞的生成与白血病的发生 | 第13-15页 |
| 2 红系分化的研究模型 | 第15-17页 |
| ·永生细胞系 | 第15-16页 |
| ·胚胎干细胞 | 第16-17页 |
| ·小鼠胎肝 | 第17页 |
| 3 调控红系的相关因子 | 第17-19页 |
| ·生长因子和信号通路 | 第17-18页 |
| ·转录调控因子 | 第18-19页 |
| ·Micro-RNA | 第19页 |
| 4 真核生物翻译起始因子 4H（EIF4H） | 第19-21页 |
| 5 技术路线 | 第21-22页 |
| 第二章 HMBA 诱导 MEL 细胞向红系细胞分化的差异蛋白质组学研究 | 第22-59页 |
| 1 前言 | 第22-23页 |
| 2 仪器、材料与方法 | 第23-32页 |
| ·仪器和试剂 | 第23-27页 |
| ·仪器 | 第23-24页 |
| ·试剂 | 第24-25页 |
| ·试剂配制 | 第25-27页 |
| ·材料与方法 | 第27-32页 |
| ·细胞培养 | 第27页 |
| ·台盼蓝排除法检测 HMBA 对 MEL 细胞增殖能力的影响 | 第27页 |
| ·MTT 比色法检测 HMBA 对 MEL 细胞活力的影响 | 第27页 |
| ·联苯胺染色法检测 HMBA 诱导 MEL 细胞向红系细胞分化 | 第27页 |
| ·红系细胞特异表面标志 Ter119 在 HMBA 处理的 MEL 细胞中的定量分析 | 第27-28页 |
| ·RT-PCR 检测 HMBA 处理的 MEL 细胞中相关基因的表达变化 | 第28-30页 |
| ·引物设计 | 第28页 |
| ·Trizol 试剂盒提取细胞总 RNA | 第28-29页 |
| ·总 RNA 的反转录: | 第29页 |
| ·半定量 PCR 检测相关基因的表达变化情况： | 第29-30页 |
| ·双向电泳 | 第30-32页 |
| ·样品制备 | 第30页 |
| ·等电聚焦 | 第30页 |
| ·IPG 胶条的平衡 | 第30-31页 |
| ·一向胶条的转移及聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第31页 |
| ·银染及图像分析 | 第31页 |
| ·胶内酶解 | 第31页 |
| ·点靶及 MALDI-TOF/TOF 质谱鉴定和数据库搜索 | 第31-32页 |
| ·Western blot 确认差异表达蛋白 | 第32页 |
| 3 实验结果 | 第32-45页 |
| ·HMBA 抑制了 MEL 细胞的增殖 | 第32-33页 |
| ·HMBA 诱导 MEL 细胞向红系细胞分化 | 第33-36页 |
| ·联苯胺染色 | 第33-34页 |
| ·HMBA 诱导 MEL 细胞表达成体血红蛋白 | 第34-35页 |
| ·红系细胞表面标志 Ter119 的表达 | 第35-36页 |
| ·双向凝胶电泳结合质谱分析 HMBA 诱导 MEL 细胞红系分化的差异表达蛋白 | 第36-44页 |
| ·确认差异表达蛋白 | 第44-45页 |
| 4 讨论 | 第45-59页 |
| ·蛋白质合成 | 第45-47页 |
| ·信号转导 | 第47-49页 |
| ·酶 | 第49-52页 |
| ·伴侣蛋白 | 第52页 |
| ·结构蛋白 | 第52-54页 |
| ·ATP/GTP 结合蛋白 | 第54页 |
| ·细胞应激蛋白 | 第54-55页 |
| ·糖酵解蛋白 | 第55页 |
| ·mRNA 剪接蛋白 | 第55页 |
| ·转录蛋白 | 第55-56页 |
| ·功能未知蛋白 | 第56-59页 |
| 第三章 真核生物翻译起始因子 4H(EIF4H)在红系分化中的功能研究 | 第59-82页 |
| 1 前言 | 第59页 |
| 2 仪器、材料与方法 | 第59-68页 |
| ·仪器和试剂 | 第59-61页 |
| ·仪器 | 第59-60页 |
| ·试剂 | 第60页 |
| ·试剂配制 | 第60-61页 |
| ·材料与方法 | 第61-68页 |
| ·材料 | 第61页 |
| ·Western blot 验证 eIF4H 在丁酸钠诱导 MEL 细胞红系分化过程中的表达情况 | 第61页 |
| ·RT-PCR 检测丁酸钠处理的 MEL 细胞中 eIF4H 基因的表达变化 | 第61页 |
| ·免疫荧光检测丁酸钠诱导 MEL 细胞红系分化过程中 eIF4H 的细胞定位 | 第61-62页 |
| ·pLKO.1-eIF4H-shRNA 质粒载体的构建 | 第62-65页 |
| ·shRNA 寡核苷酸序列的设计 | 第62页 |
| ·shRNA 寡核苷酸序列的退火 | 第62-63页 |
| ·pLKO.1-TRC 质粒载体的双酶切 | 第63页 |
| ·pLKO.1- TRC 克隆载体与退火寡核苷酸双链的连接 | 第63-64页 |
| ·E.coli DH5α感受态细菌的制备 | 第64页 |
| ·转化 | 第64页 |
| ·EcoR I 和 Nco I 双酶切鉴定 | 第64-65页 |
| ·测序鉴定 | 第65页 |
| ·病毒包装 | 第65-66页 |
| ·eIF4H 低表达的 MEL 细胞稳定株的建立 | 第66页 |
| ·MTT 比色法检测 eIF4H 低表达对 MEL 细胞增殖能力的影响 | 第66页 |
| ·流式细胞术检测 eIF4H 低表达对 MEL 细胞周期的影响 | 第66页 |
| ·eIF4H 低表达对丁酸钠诱导 MEL 细胞向红系细胞分化的影响 | 第66-67页 |
| ·Western blot 分析 eIF4H 低表达对相关蛋白表达的影响 | 第67页 |
| ·RT-PCR 分析 eIF4H 低表达对相关基因表达的影响 | 第67页 |
| ·N-TAP-eIF4H 亚型Ⅰ和亚型Ⅱ载体的构建 | 第67-68页 |
| ·引物设计 | 第67页 |
| ·RNA 的提取和反转录 PCR | 第67页 |
| ·质粒载体和目的基因的双酶切 | 第67-68页 |
| ·连接与转化 | 第68页 |
| ·双酶切鉴定与测序鉴定 | 第68页 |
| ·N-TAP-eIF4H 亚型Ⅰ和亚型Ⅱ质粒转染 293T 细胞和融合蛋白的表达 | 第68页 |
| ·数据统计 | 第68页 |
| 3 结果 | 第68-80页 |
| ·eIF4H 蛋白在丁酸钠和 HMBA 处理的 MEL 细胞中表达均下调 | 第68-69页 |
| ·eIF4H 在丁酸钠和 HMBA 处理的 MEL 细胞中的基因水平表达没有变化 | 第69-71页 |
| ·eIF4H 蛋白在丁酸钠诱导 MEL 细胞向红系细胞分化过程中的亚细胞定位 | 第71页 |
| ·eIF4H 干扰载体的构建 | 第71-72页 |
| ·eIF4H 蛋白低表达稳定株的建立 | 第72-73页 |
| ·eIF4H 蛋白低表达抑制 MEL 细胞的增殖 | 第73-74页 |
| ·eIF4H 蛋白低表达阻碍了 MEL 细胞的周期进程 | 第74-75页 |
| ·eIF4H 蛋白低表达促进丁酸钠诱导 MEL 细胞向红系细胞分化 | 第75-77页 |
| ·eIF4H 低表达促进红系分化/抑制增殖的机制的探究 | 第77-78页 |
| ·eIF4H 低表达对红系分化/增殖相关蛋白表达的影响 | 第77页 |
| ·RT-PCR 检测红系分化和增殖相关基因的表达情况 | 第77-78页 |
| ·N-TAP-eIF4H 串联亲和纯化载体的构建 | 第78-79页 |
| ·N-TAP-eIF4H 融合蛋白的表达 | 第79-80页 |
| 4 讨论 | 第80-82页 |
| 第四章 结论和展望 | 第82-84页 |
| 1 HMBA 诱导 MEL 细胞红系分化的差异蛋白质组学 | 第82页 |
| 2 EIF4H 在红系分化中的功能研究 | 第82页 |
| 3 展望 | 第82-84页 |
| 参考文献 | 第84-90页 |
| 发表论文情况 | 第90-91页 |
| 致谢 | 第91页 |
