| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 缩略表 | 第7-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-17页 |
| 1 雌激素受体Β（ESTROGEN RECEPTOR BETA）研究概况 | 第11-12页 |
| ·雌激素与雌激素受体的功能 | 第11页 |
| ·ERβ与癌症的关系 | 第11-12页 |
| 2 MRNA3’UTR 的功能概述 | 第12-13页 |
| 3 RNA 结合蛋白的研究背景 | 第13-14页 |
| 4 RNA 结合蛋白 VIGILIN 的结构及功能 | 第14-15页 |
| 5 RNA 结合蛋白 ILF3 的功能 | 第15页 |
| 6 本课题研究的目的和意义 | 第15-17页 |
| 第二章 分别构建过表达 VIGILIN、ILF3 载体并研究其在 MCF-7 细胞中对 ERΒ表达量的影响 | 第17-36页 |
| 1 前言 | 第17页 |
| 2 实验材料、试剂和仪器 | 第17-20页 |
| ·实验材料 | 第17页 |
| ·实验试剂 | 第17-19页 |
| ·实验仪器 | 第19页 |
| ·溶液配制 | 第19-20页 |
| 3 实验方法 | 第20-29页 |
| ·构建 Vigilin 过表达的慢病毒载体 | 第20-26页 |
| ·引物设计 | 第20-21页 |
| ·PCR 扩增 FLAG-Vigilin 基因 | 第21页 |
| ·PCR 产物回收 | 第21-22页 |
| ·PLJM1-EGFP 载体抽提 | 第22页 |
| ·载体和基因片段双酶切 | 第22-23页 |
| ·酶切产物胶回收 | 第23页 |
| ·T4DNA 连接酶连接 | 第23页 |
| ·E.coli Top 10 感受态制备 | 第23页 |
| ·转化感受态细胞 | 第23-24页 |
| ·菌落 PCR 鉴定 | 第24页 |
| ·双酶切鉴定 | 第24页 |
| ·测序鉴定 | 第24页 |
| ·碱裂解法大量抽提质粒 | 第24-25页 |
| ·慢病毒载体的包装 | 第25-26页 |
| ·病毒侵染 | 第26页 |
| ·构建 ILF3 过表达的慢病毒载体 | 第26-29页 |
| ·载体和基因片段双酶切 | 第26页 |
| ·酶切产物胶回收 | 第26-27页 |
| ·T4DNA 连接酶连接 | 第27页 |
| ·转化感受态 | 第27页 |
| ·菌落 PCR 鉴定 | 第27页 |
| ·细胞培养 | 第27-28页 |
| ·病毒包装及侵染 | 第28页 |
| ·细胞裂解及蛋白样品的制备 | 第28页 |
| ·免疫印迹（Western Blot） | 第28-29页 |
| 4 实验结果 | 第29-34页 |
| ·Vigilin 过表达载体的构建结果 | 第29-31页 |
| ·FLAG-Vigilin 基因 PCR 扩增结果 | 第29-30页 |
| ·pLJM1-EGFP 载体和 FLAG-Vigilin 基因片段酶切结果 | 第30-31页 |
| ·ILF3 过表达载体的构建结果 | 第31-32页 |
| ·FLAG-ILF3 基因片段和 pLJM1-EGFP 载体酶切结果 | 第31页 |
| ·重组质粒的 PCR 鉴定结果 | 第31-32页 |
| ·pLJM1-FLAG-Vigilin 的表达与鉴定 | 第32-33页 |
| ·Vigilin 蛋白过表达对 ERs 表达量的影响 | 第33页 |
| ·pLJM1-FLAG-ILF3 的表达与鉴定 | 第33-34页 |
| ·ILF3 蛋白过表达后对 ERs 表达量的影响 | 第34页 |
| 5 讨论 | 第34-36页 |
| 第三章 构建 VIGILIN 低表达的 MCF-7 细胞及结晶紫实验 | 第36-41页 |
| 1 前言 | 第36页 |
| 2 实验材料、试剂和仪器 | 第36-37页 |
| ·实验材料 | 第36页 |
| ·实验试剂 | 第36-37页 |
| ·实验仪器 | 第37页 |
| ·溶液配制 | 第37页 |
| 3 实验方法 | 第37-38页 |
| ·构建 Vigilin 低表达的 MCF-7 细胞 | 第37-38页 |
| ·病毒包装 | 第37页 |
| ·病毒浓缩 | 第37页 |
| ·病毒侵染及稳定株的筛选 | 第37-38页 |
| ·Western Blot | 第38页 |
| ·结晶紫染色实验 | 第38页 |
| 4 实验结果 | 第38-40页 |
| ·pLKO.1-Vigilin-shRNA 干扰 MCF-7 细胞稳定株的筛选 | 第38-39页 |
| ·Vigilin 干扰后，雌激素受体 ERα，ERβ和 ILF3 蛋白变化 | 第39-40页 |
| ·利用结晶紫染色实验检测 VIGILIN 蛋白对细胞增殖的影响 | 第40页 |
| 5 讨论 | 第40-41页 |
| 第四章 利用 EMSA 实验和荧光素酶双报告实验研究 VIGILIN 蛋白与 ERΒMRNA3’UTR 的结合 | 第41-47页 |
| 1 前言 | 第41-42页 |
| 2 实验材料、试剂和仪器 | 第42-43页 |
| ·实验材料 | 第42页 |
| ·实验试剂 | 第42页 |
| ·实验仪器 | 第42页 |
| ·溶液配制 | 第42-43页 |
| 3 实验方法 | 第43-44页 |
| ·EMSA 实验 | 第43页 |
| ·Dual-luciferase 实验 | 第43-44页 |
| 4 实验结果 | 第44-45页 |
| ·利用 EMSA 实验验证 Vigilin 及 ILF3 与 ERβ mRNA3’UTR 的结合 | 第44页 |
| ·利用双荧光素酶报告实验检测 Vigilin 对 ERβ mRNA3’UTR 的结合 | 第44-45页 |
| 5 讨论 | 第45-47页 |
| 结论与展望 | 第47-48页 |
| 1 结论 | 第47页 |
| 2 展望 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-51页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第51-52页 |
| 致谢 | 第52页 |
