| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-10页 |
| 缩略词表 | 第10-11页 |
| 第一章 腺相关病毒载体及其在基因治疗中的应用 | 第11-25页 |
| ·引言 | 第11-15页 |
| ·腺相关病毒简介 | 第11-12页 |
| ·腺相关病毒载体及其在基因治疗中的应用 | 第12-14页 |
| ·AAV 载体在基因治疗中的应用概况 | 第14-15页 |
| ·腺相关病毒载体生产方式的进展 | 第15-20页 |
| ·质粒转染加腺病毒感染的方式 | 第15页 |
| ·辅助质粒代替腺病毒的方式 | 第15-16页 |
| ·采用稳定细胞系的方式 | 第16-17页 |
| ·杆状病毒-昆虫细胞表达系统 | 第17-20页 |
| ·实验设计方案及课题内容 | 第20-25页 |
| ·课题研究目的以及意义 | 第20页 |
| ·实验设计方案 | 第20-21页 |
| ·课题创新点 | 第21-22页 |
| ·实验内容及流程 | 第22-25页 |
| 第二章 重组 pFastBacDual 载体的构建及菌内 Bacmid 重组 | 第25-56页 |
| ·实验器材 | 第25-30页 |
| ·材料 | 第25页 |
| ·仪器和设备 | 第25-26页 |
| ·试剂及试剂盒 | 第26-27页 |
| ·主要试剂的配制 | 第27-28页 |
| ·所用引物 | 第28-29页 |
| ·所用 LINKER | 第29-30页 |
| ·转化用 E.coli DH5α感受态的制备 | 第30页 |
| ·实验方法 | 第30-47页 |
| ·重组 pFBD 载体构建 | 第30-46页 |
| ·重组 pFBD 载体在 DH10Bac 中的转座重组及重组 Bacmid 的提取 | 第46-47页 |
| ·结果 | 第47-54页 |
| ·相关基因或片段的 PCR 结果 | 第47-50页 |
| ·pFBD-RepIN 及 pFBD-RC 的酶切鉴定 | 第50页 |
| ·pFBD-Linker 载体的酶切鉴定 | 第50-51页 |
| ·pSNAV-EGFP 和 pSNAV-TRAIL 载体的酶切鉴定 | 第51页 |
| ·pFBD-EGFP 和 pFBD-TRAIL 载体的酶切鉴定 | 第51-52页 |
| ·pFBD-mRep 的 PCR 鉴定以及 pFBD-mRC 的酶切鉴定 | 第52页 |
| ·重组 Bacmid 的 PCR 鉴定 | 第52-54页 |
| ·讨论 | 第54-56页 |
| 第三章 重组杆状病毒的包装、扩增及滴度测定 | 第56-66页 |
| ·实验材料 | 第56页 |
| ·材料与试剂 | 第56页 |
| ·荧光定量 PCR 引物 | 第56页 |
| ·实验方法 | 第56-60页 |
| ·Sf9 细胞的培养 | 第56-57页 |
| ·重组杆状病毒的包装 | 第57页 |
| ·重组杆状病毒的扩增 | 第57页 |
| ·重组杆状病毒 DNA 的提取 | 第57-58页 |
| ·荧光定量 PCR 测定重组杆状病毒的滴度 | 第58-60页 |
| ·结果 | 第60-64页 |
| ·重组 Bacmid 的转染效果 | 第60-61页 |
| ·重组杆状病毒的滴度测定 | 第61-64页 |
| ·讨论 | 第64-66页 |
| 第四章 重组 AAV 的生产、纯化以及滴度和病毒活力测定 | 第66-77页 |
| ·实验器材 | 第66-68页 |
| ·材料与试剂 | 第66页 |
| ·试剂的配制 | 第66-68页 |
| ·试验方法 | 第68-71页 |
| ·相关基因表达的检测 | 第68-69页 |
| ·重组 AAV-EGFP 和 AAV-TRAIL 的生产 | 第69-70页 |
| ·重组腺相关病毒的纯化 | 第70页 |
| ·病毒滴度测定及生产能力的初步评估 | 第70-71页 |
| ·结果 | 第71-74页 |
| ·昆虫细胞表达系统 Cap 蛋白的考马斯亮蓝染和 TRAIL 蛋白的银染检测 | 第71-72页 |
| ·AAV-EGFP 病毒基因组滴度检测及生产能力的初步评估 | 第72-73页 |
| ·病毒活力的检测 | 第73-74页 |
| ·讨论 | 第74-77页 |
| 第五章 结论 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-82页 |
| 在学期间发表的文章 | 第82-83页 |
| 致谢 | 第83页 |
