| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-16页 |
| 第1章 研究背景 | 第16-40页 |
| ·结核分枝杆菌及其相关疾病概述 | 第16-17页 |
| ·结核病流行情况 | 第16页 |
| ·结核病发病机理 | 第16-17页 |
| ·结核病的治疗现状 | 第17页 |
| ·结核病细胞因子网络研究进展 | 第17-19页 |
| ·细胞因子的网络性 | 第17-18页 |
| ·细胞因子网络研究 | 第18-19页 |
| ·结核病紧密相关细胞因子及其与其他细胞因子间的相互作用 | 第19-23页 |
| ·INF-γ | 第19-20页 |
| ·IL-12 | 第20页 |
| ·IL-4和IL-4δ2 | 第20-21页 |
| ·IL-2 | 第21-22页 |
| ·TNF-α | 第22页 |
| ·GM-CSF | 第22-23页 |
| ·结核病细胞因子网络研究意义 | 第23页 |
| ·结核分枝杆菌感染免疫治疗研究总体研究思路 | 第23-24页 |
| ·艰难梭状芽孢杆菌及其相关疾病CDI概述 | 第24-28页 |
| ·CDI流行病学 | 第24-25页 |
| ·CDI病症、传染及复发 | 第25-26页 |
| ·CDI诊断 | 第26-27页 |
| ·CDI治疗 | 第27-28页 |
| ·CDI病理 | 第28-36页 |
| ·主要毒性因子 | 第29-32页 |
| ·TcdA和TcdB的结构和分子机理 | 第29-30页 |
| ·TcdA和TcdB的细胞毒性 | 第30-32页 |
| ·肠毒性 | 第32页 |
| ·二元毒素(CDT) | 第32-33页 |
| ·毒素诱导的其它调节因子在CDI中的作用 | 第33-34页 |
| ·表层蛋白及黏附 | 第34-35页 |
| ·免疫细胞及其相关细胞因子在CDI中的作用 | 第35-36页 |
| ·CDI动物模型 | 第36页 |
| ·CDI当前病理假说的矛盾性 | 第36-38页 |
| ·研究意义、前期基础和课题来源 | 第38-39页 |
| ·研究意义 | 第38页 |
| ·前期基础 | 第38页 |
| ·课题来源 | 第38-39页 |
| ·总体研究方案 | 第39-40页 |
| ·总体思路 | 第39页 |
| ·主要研究内容和目标 | 第39-40页 |
| 第2章 实验材料和方法 | 第40-53页 |
| ·结核分枝杆菌感染的免疫治疗研究实验材料 | 第40页 |
| ·结核分枝杆菌感染的免疫治疗研究动物实验分组及感染 | 第40-41页 |
| ·动物分组 | 第40页 |
| ·感染方法 | 第40页 |
| ·给药治疗 | 第40-41页 |
| ·艰难梭状芽孢杆菌毒素蛋白结构域功能与病理研究实验材料与设备 | 第41-43页 |
| ·细胞与细胞培养基 | 第41-42页 |
| ·抗体 | 第42页 |
| ·分子克隆试剂盒及感受态细胞 | 第42页 |
| ·荧光染料和显影剂 | 第42页 |
| ·抗生素 | 第42页 |
| ·酶 | 第42页 |
| ·引物 | 第42-43页 |
| ·动物 | 第43页 |
| ·其他 | 第43页 |
| ·主要仪器设备 | 第43页 |
| ·实验方法 | 第43-53页 |
| ·细胞培养 | 第43页 |
| ·分子克隆 | 第43-46页 |
| ·基因操作 | 第43-45页 |
| ·蛋白诱导表达和纯化 | 第45-46页 |
| ·免疫荧光染色 | 第46-47页 |
| ·荧光标记野生型和突变型毒素 | 第47页 |
| ·毒素引起的细胞形态变化 | 第47页 |
| ·毒素与细胞的结合以及进入细胞 | 第47-48页 |
| ·六磷酸肌醇(Insp6)诱导的毒素自水解 | 第48页 |
| ·在无细胞体系中检测毒素葡萄糖基转移酶活性 | 第48页 |
| ·圆二色谱分析野生型毒素蛋白TcdB和变异毒素蛋白TxB-D97二级结构 | 第48页 |
| ·2-(p-Toluidinyl)naphthalene-6-sulfonic acid,sodium salt(TNS)荧光探针分析蛋白构像变化 | 第48页 |
| ·免疫沉淀 | 第48-49页 |
| ·人上皮细胞组织体外建立、培养及生物功能检测 | 第49-50页 |
| ·小鼠回肠封闭手术 | 第50页 |
| ·MPO(Myeloperoxidase)分析 | 第50页 |
| ·RT-PCR分析 | 第50-52页 |
| ·病理组织学 | 第52页 |
| ·反复冻融法裂解上皮细胞组织 | 第52页 |
| ·表达毒素的巨大芽孢杆菌小鼠灌胃实验 | 第52-53页 |
| 第3章 IL-2和GM-CSF免疫治疗在药物敏感结核杆菌H37Rv感染模型中的疗效评估 | 第53-56页 |
| ·存活率及脾脏重量分析 | 第53页 |
| ·肺脏和脾脏的菌落计数 | 第53-54页 |
| ·组织病理学分析 | 第54页 |
| ·本章小结 | 第54-56页 |
| 第4章 IL-2和GM-CSF免疫治疗在耐多药结核杆菌OB35感染模型中的疗效评估 | 第56-60页 |
| ·存活率及平均体重分析 | 第56-57页 |
| ·肺脏和脾脏的菌落计数 | 第57页 |
| ·组织病理学分析 | 第57-59页 |
| ·本章小结 | 第59-60页 |
| 第5章 跨膜区一段包含有97个氨基酸的小片段对艰难梭菌TcdB的细胞活性至关重要 | 第60-70页 |
| ·突变型TxB-D97蛋白与野生型TcdB蛋白有相似的二级结构 | 第61-62页 |
| ·突变毒素TxB-D97的细胞毒性减弱 | 第62页 |
| ·突变毒素TxB-D97与细胞结合的能力以及被细胞捕捉的能力与野生型毒素TcdB基本相似 | 第62-64页 |
| ·野生型毒素TcdB和突变型毒素TxB-D97均能发生pH诱导的构像变化 | 第64-66页 |
| ·TxB-D97的半胱氨酸水解酶(CPD)及葡萄糖基转移酶活性(GT)与野生型TcdB相同 | 第66-67页 |
| ·TxB-D97不能将毒性GT运送到宿主细胞的胞质中 | 第67-69页 |
| ·本章小结 | 第69-70页 |
| 第6章 受体结合区(RBD)和糖基转移酶区(GT)与肠毒性的关系 | 第70-79页 |
| ·嵌合体毒素结构及生物活性 | 第71-72页 |
| ·嵌合体毒素肠毒性分析 | 第72-76页 |
| ·GT活性缺失导致TcdA丧失肠毒性 | 第76-78页 |
| ·本章小结 | 第78-79页 |
| 第7章 艰难梭状杆芽孢菌TcdA和TcdB在CDI病理中的相互作用关系 | 第79-95页 |
| ·单独的TcdB能在动物中引起疾病 | 第79-80页 |
| ·TcdB致病机理探索 | 第80-88页 |
| ·艰难梭菌毒素TcdA和TcdB破坏人肠道上皮细胞屏障的特点 | 第81-87页 |
| ·TcdB比TcdA有更强的瓦解人上皮细胞组织的能力 | 第81-84页 |
| ·艰难梭状杆菌毒素增强了人上皮细胞组织旁通路渗透性 | 第84-86页 |
| ·人上皮细胞组织的上下表面均存在艰难梭状杆菌毒素TcdA、TcdB的受体 | 第86-87页 |
| ·aTcdA或aTcdB都不能引起HCT8上皮组织损伤 | 第87页 |
| ·TcdB与TcdA一样能在动物体内破坏上皮细胞层紧密连接 | 第87-88页 |
| ·TcdA和TcdB在多个动物模型中的病理作用 | 第88-93页 |
| ·TcdA和TcdB都能进入血液循环引起血毒症 | 第89-90页 |
| ·炎症反应：TcdB诱导的炎症反应弱于TcdA | 第90-91页 |
| ·组织损伤：TcdB比TcdA具有更强的全身毒性攻击 | 第91-93页 |
| ·本章小结 | 第93-95页 |
| 第8章 讨论 | 第95-102页 |
| ·多个细胞因子辅助治疗是潜在治疗结核病的新策略 | 第95-96页 |
| ·D97是否是艰难梭状芽孢杆菌TcdB0新的结构功能区 | 第96-98页 |
| ·哪个功能区决定了毒素的肠毒性 | 第98-100页 |
| ·TcdB是肠毒素吗 | 第100-101页 |
| ·血毒症与体循环毒性 | 第101-102页 |
| 第9章 结论与展望 | 第102-105页 |
| ·结论 | 第102-103页 |
| ·创新点 | 第103页 |
| ·展望 | 第103-105页 |
| 附录I | 第105-106页 |
| 参考文献 | 第106-122页 |
| 致谢 | 第122-123页 |
