| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-14页 |
| 第一章 纤维素酶及其相关研究进展 | 第14-36页 |
| ·纤维素结构及降解 | 第14-15页 |
| ·纤维素酶综述 | 第15-34页 |
| ·纤维素酶的来源 | 第15-16页 |
| ·纤维素酶的组成、结构和家族分类 | 第16-20页 |
| ·纤维素酶的组成 | 第16页 |
| ·纤维素酶的三维结构 | 第16-18页 |
| ·纤维素酶的家族分类和催化机制 | 第18-20页 |
| ·纤维素酶的协同降解机制 | 第20-21页 |
| ·纤维素酶的酶学性质 | 第21-22页 |
| ·纤维素酶基因克隆与异源表达 | 第22-33页 |
| ·纤维素酶基因克隆 | 第22-31页 |
| ·纤维素酶异源表达 | 第31-33页 |
| ·纤维素酶的应用 | 第33-34页 |
| ·研究内容和意义 | 第34-36页 |
| ·研究内容 | 第34页 |
| ·研究意义 | 第34-36页 |
| 第二章 B.subtilis LH EG的基因克隆与高效表达 | 第36-60页 |
| ·引言 | 第36页 |
| ·材料 | 第36-41页 |
| ·材料 | 第36页 |
| ·药品和试剂 | 第36-38页 |
| ·培养基 | 第38-41页 |
| ·引物 | 第41页 |
| ·主要仪器 | 第41页 |
| ·方法 | 第41-49页 |
| ·葡萄糖标准曲线的制作 | 第41-42页 |
| ·EG高产菌株的筛选 | 第42页 |
| ·EG酶活的测定 | 第42页 |
| ·细菌基因组的抽提 | 第42-43页 |
| ·PCR | 第43页 |
| ·DNA琼脂糖凝胶电泳 | 第43页 |
| ·DNA片段的回收 | 第43-44页 |
| ·DNA片段与T载体的连接 | 第44页 |
| ·大肠杆菌的转化 | 第44页 |
| ·大肠杆菌菌液PCR | 第44页 |
| ·质粒的提取 | 第44-45页 |
| ·E.coli Rosetta(DE3)感受态细胞的制备 | 第45页 |
| ·P.pastoris GS115感受态细胞的制备 | 第45页 |
| ·电转杯的灭菌 | 第45页 |
| ·P.pastoris GS115的电转化 | 第45-46页 |
| ·双酶切 | 第46页 |
| ·DNA片段与质粒的连接 | 第46页 |
| ·P.pastoris-eg菌液PCR | 第46页 |
| ·高拷贝P.pastoris-eg的筛选 | 第46-47页 |
| ·P.pastoris-eg和E coli-eg的构建 | 第47页 |
| ·P.pastoris-eg Mut+和Muts的鉴定 | 第47页 |
| ·MBSEG的诱导表达 | 第47-48页 |
| ·MBSEG酶活的测定 | 第48页 |
| ·E.coli-eg培养基优化 | 第48页 |
| ·E.coli-eg发酵条件的优化 | 第48-49页 |
| ·接种量、初始pH、诱导温度、摇床转速的优化 | 第48页 |
| ·诱导因子优化 | 第48-49页 |
| ·生物软件 | 第49页 |
| ·结果与讨论 | 第49-59页 |
| ·葡萄糖标准曲线的确定 | 第49-50页 |
| ·纤维素酶最高产菌的确定 | 第50页 |
| ·B.subtilis LH EG的基因分析 | 第50-51页 |
| ·pPeg阳性克隆子的确定 | 第51-52页 |
| ·pEeg阳性克隆子的确定 | 第52页 |
| ·P.pastoris-eg-G甲醇利用型的确定 | 第52-53页 |
| ·MBSEG表达的结果与分析 | 第53-54页 |
| ·产MBSEG-2最优培养基的确定 | 第54页 |
| ·产MBSEG-2最优氮源的确定 | 第54-55页 |
| ·硫酸镁对产MBSEG-2的影响 | 第55页 |
| ·产MBSEG-2最佳接种量的确定 | 第55页 |
| ·产MBSEG-2最适pH的确定 | 第55-56页 |
| ·产MBSEG-2最适温度的确定 | 第56页 |
| ·产MBSEG-2最适转速的确定 | 第56-57页 |
| ·正交试验结果与分析 | 第57-59页 |
| ·本章小结 | 第59-60页 |
| 第三章 MBSEG的纯化、表征及其应用于生物石洗的基础研究 | 第60-72页 |
| ·引言 | 第60页 |
| ·材料 | 第60-61页 |
| ·材料 | 第60页 |
| ·药品和试剂 | 第60页 |
| ·主要仪器 | 第60-61页 |
| ·方法 | 第61-65页 |
| ·MBSEG-1的纯化 | 第61页 |
| ·MBSEG-2的纯化 | 第61-62页 |
| ·纤维素内切酶活的测定 | 第62页 |
| ·纤维素外切酶活的测定 | 第62页 |
| ·β-葡萄糖苷酶活的测定 | 第62页 |
| ·avicel酶活性的测定 | 第62-63页 |
| ·滤纸酶活性的测定 | 第63页 |
| ·木聚糖酶活的测定 | 第63页 |
| ·α-glucan酶活的测定 | 第63页 |
| ·最适pH的测定 | 第63页 |
| ·pH稳定性的测定 | 第63页 |
| ·最适反应温度的测定 | 第63页 |
| ·热稳定性的测定 | 第63页 |
| ·金属离子对MBSEG的影响 | 第63-64页 |
| ·MBSEG反应动力学常数的测定 | 第64页 |
| ·MBSEG的去糖基化 | 第64页 |
| ·MBSEG的有限水解 | 第64页 |
| ·MBSEG的SDS-PAGE活性染色 | 第64页 |
| ·MBSEG和EGT测序 | 第64页 |
| ·MBSEG和EGT洗牛仔布 | 第64-65页 |
| ·蛋白3D模型的构建 | 第65页 |
| ·蛋白质浓度的测定 | 第65页 |
| ·结果与讨论 | 第65-71页 |
| ·蛋白质浓度标准曲线的确定 | 第65页 |
| ·MBSEG的纯化结果与分析 | 第65-67页 |
| ·MBSEG酶学性质的表征和分析 | 第67-69页 |
| ·MBSEG-1的去糖基化分析 | 第69页 |
| ·截短活性EG的确定与分析 | 第69-70页 |
| ·MBSEG和EGT应用于生物石洗的基础研究 | 第70-71页 |
| ·本章小结 | 第71-72页 |
| 第四章 Petriella setifera LH鉴定、EG酶学表征及EG应用于生物石洗的基础研究 | 第72-82页 |
| ·引言 | 第72页 |
| ·材料 | 第72-73页 |
| ·材料 | 第72页 |
| ·药品和试剂 | 第72页 |
| ·培养基 | 第72-73页 |
| ·引物 | 第73页 |
| ·主要仪器 | 第73页 |
| ·方法 | 第73-75页 |
| ·菌种筛选 | 第73页 |
| ·真菌基因组的提取 | 第73-74页 |
| ·部分EF-1α序列系统发育树的构建 | 第74页 |
| ·真菌形态学的观察 | 第74页 |
| ·中性EG的诱导 | 第74页 |
| ·EG的纯化和浓缩 | 第74页 |
| ·中性EG的酶学表征 | 第74-75页 |
| ·Novoprime A800和中性EG水洗牛仔布 | 第75页 |
| ·结果与讨论 | 第75-81页 |
| ·18S rDNA部分序列的分析 | 第75页 |
| ·EF-1α部分序列系统发育树的分析 | 第75-76页 |
| ·Petriella sp.PDA平板上的观察结果 | 第76-77页 |
| ·Petriella sp.显微镜下的观察结果 | 第77-78页 |
| ·Pe.setifera LH中性EG活性染色的结果与分析 | 第78页 |
| ·温度对Pe.setifera LH中性EG的酶活和稳定性的影响 | 第78-79页 |
| ·pH对Pe.setifera LH中性EG的酶活和稳定性的影响 | 第79页 |
| ·金属离子和EDTA对Pe.setifera LH EG活性的影响 | 第79-80页 |
| ·Pe.setifera LH中性EG应用于生物石洗的基础研究 | 第80-81页 |
| ·本章小结 | 第81-82页 |
| 第五章 Phaeosphaeria sp.LH21两个中性EG的基因克降、序列分析与酶学性质表征 | 第82-101页 |
| ·引言 | 第82页 |
| ·材料 | 第82-85页 |
| ·材料 | 第82页 |
| ·药品和试剂 | 第82页 |
| ·菌株和质粒 | 第82-83页 |
| ·培养基 | 第83-84页 |
| ·引物 | 第84-85页 |
| ·主要仪器 | 第85页 |
| ·方法 | 第85-89页 |
| ·深海真菌的筛选 | 第85页 |
| ·深海真菌的分子生物学鉴定 | 第85页 |
| ·深海真菌的基因组走读 | 第85-88页 |
| ·深海真菌RNA的提取 | 第88页 |
| ·RT-PCR | 第88页 |
| ·mgh45eg-1和mgh45eg-2的扩增 | 第88-89页 |
| ·其它分子生物学方法和生物化学方法 | 第89页 |
| ·结果与讨论 | 第89-100页 |
| ·Phaeosphaeria sp.LH21的鉴定 | 第89-91页 |
| ·Phaeosphaeria sp.LH21两个GH45 EG基因的获得 | 第91-92页 |
| ·gh45eg-1和gh45eg-2基因的分析 | 第92-94页 |
| ·mGH45EG-1和mGH45EG-23D结构的初步分析 | 第94-96页 |
| ·重组酶mGH45EG-1和mGH45EG-2分子量的测定 | 第96-97页 |
| ·重组酶mGH45EG-1和mGH45EG-2底物谱的确定 | 第97-98页 |
| ·温度和pH对重组酶mGH45EG-1和mGH45EG-2的活性和稳定性的影响 | 第98-99页 |
| ·金属离子和EDTA对重组酶mGH45EG-1和mGH45EG-2活性的影响 | 第99-100页 |
| ·本章小结 | 第100-101页 |
| 第六章 结论与展望 | 第101-103页 |
| ·结论 | 第101-102页 |
| ·展望 | 第102-103页 |
| 参考文献 | 第103-114页 |
| 博士期间发表论文 | 第114-115页 |
| 致谢 | 第115页 |
